Centrum edukacji klinicznej (Polski)

Pytanie 1. Jakie są kliniczne i genetyczne cechy napadowej nocnej hemoglobinurii (PNH)?

napadowa nocna hemoglobinuria (PNH) jest rzadką chorobą charakteryzującą się przewlekłą hemolizą, zwiększonym ryzykiem zakrzepicy żylnej i niewydolności szpiku kostnego. Hemoliza wewnątrznaczyniowa powoduje wolną hemoglobinę, która z kolei może przyczynić się do bólu, zmęczenia, dysmotyczności przełyku i zaburzeń erekcji.

PNH charakteryzuje się również mutacją w genie PIGA i niedoborem białek związanych z GPI., Cząsteczka glifosfoinozytolu (GPI) umożliwia wiązanie się wielu różnych białek z błoną komórkową. Do syntezy anchorów GPI potrzeba ponad 20 genów, z których jednym jest gen PIGA znajdujący się na chromosomie X. Mutacja nabyta w pojedynczym Genie PIGA u mężczyzny lub w jednej kopii u kobiety z powodu inaktywacji X (lionizacji) jest wystarczająca do wytworzenia niedoborów w ekspresji białek związanych z GPI., Jeśli ta mutacja występuje w samo-replikującej się hematologicznej komórce macierzystej, ekspansja tego PNH „klonu” może prowadzić do niedoboru GPI populacji komórek, potencjalnie we wszystkich liniach hematologicznych.

Pytanie 2. Dlaczego cytometria przepływowa służy do diagnostyki PNH?

cytometria przepływowa jest wrażliwa i bardziej pouczająca niż analiza mutacji. Jednocześnie oceniając różne populacje komórek, cytometria przepływowa może ocenić wielkość klonu PNH w każdym z powszechnie dotkniętych krwiotwórczych linii komórkowych (erytrocyty, granulocyty i monocyty).,1,2 W ten sposób cytometria przepływowa może określić, czy pacjent ma zmniejszoną (częściową) ekspresję białek GPI (tj. PNH typu II) lub całkowity brak białek GPI (tj. PNH typu III). Pacjenci z typem III są bardziej narażeni na ciężką hemolizę, ponieważ brak CD55 związanego z GPI sprawia, że RBC jest bardziej wrażliwe na lizy związane z dopełniaczem.

pytanie 3. Jaki jest typ próbki i metoda cytometryczna stosowana przez Quest Diagnostics?

krew obwodowa jest jedyną odpowiednią próbką do badania cytometrii przepływowej PNH. Nie zaleca się pobierania próbek szpiku kostnego.,

Nasz test na PNH (kod testu 16433) jest testem o wysokiej czułości, który ocenia CD59 związany z GPI na erytrocytach. Wykorzystuje kombinację kilku markerów związanych z GPI i ligand pan-GPI, FLAER (fluorescencyjna aerolizyna), do oceny granulocytów i monocytów. Dodatkowe antygeny transmembrane są używane do odróżnienia różnych populacji komórek.

Pytanie 4. Jaka jest czułość testu?

czułość analityczna naszego testu wynosi 0,01%; może wykryć 1 komórkę z niedoborem GPI w 10 000 komórkach., Jednak wystarczająca hipokelularność, która może wystąpić w przypadkach aplastycznych, może ograniczyć wrażliwość. Gdy tak się stanie, zostanie to wskazane w raporcie.

Pytanie 5. Jakie jest znaczenie wielkości klonu PNH przy diagnozie?

podczas prezentacji większość pacjentów z PNH będzie miała dominujący klon PNH wykrywalny w 3 analizowanych liniach. Jednak stopień hemolizy, szczególna mutacja PIGA i objawy prezentujące mogą mieć wpływ na wielkość klonu., Małe klony PNH (poniżej 5%) mogą być również związane z zespołami mielodysplastycznymi (MDS) i niedokrwistością aplastyczną, więc korelacja kliniczna jest niezbędna w badaniach wykazujących mały klon PNH.3

pytanie 6. Jaki odstęp między kolejnymi badaniami jest zalecany po diagnozie?

wytyczne zalecają monitorowanie rozmiaru klonu PNH w regularnych odstępach czasu.1 Jeśli pacjent jest stabilny klinicznie, badanie cytometryczne przepływu raz w roku może być wystarczające. Jednakże, jeśli objawy nawracają lub Wyniki innych badań laboratoryjnych wykazują progresję, zaleca się częstsze badania., Cytometria seryjna jest szczególnie przydatna do określenia odpowiedzi po rozpoczęciu immunoterapii ekulizumabem.4

u pacjentów z niedokrwistością aplastyczną lub MDS o niskim stopniu zaawansowania i wstępnym ujemnym teście PNH można wskazać badanie kontrolne w celu monitorowania pojawienia się klonu PNH.

1. Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, et al. Wytyczne diagnostyki i monitorowania napadowej nocnej hemoglobinurii i zaburzeń pokrewnych za pomocą cytometrii przepływowej. Cytometria B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,
2. Normalne wzorce ekspresji glikozylofosfatydyloinozytolu zakotwiczonych białek na różnych podzbiorach obwodowych komórek krwi: ramka odniesienia do diagnozy napadowej nocnej hemoglobinurii. Cytometria. 2006; 70B: 71-81.
3. Znaczenie kliniczne niewielkiej populacji napadowych, nocnych komórek typu hemoglobinuria w zespole niewydolności szpiku kostnego. Krew. 2002;100:3897-3902.
4. Hillmen P, Young NS, Schubert J, et al., Inhibitor dopełniacza ekulizumabu w napadowej nocnej hemoglobinurii. N Engl J Med. 2006;355:1233-1243.