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Frage 1. Was sind die klinischen und genetischen Merkmale der paroxysmalen nächtlichen Hämoglobinurie (PNH)?

Paroxysmale nächtliche Hämoglobinurie (PNH) ist eine seltene Erkrankung, die durch chronische Hämolyse, erhöhtes Risiko für Venenthrombosen und Knochenmarkversagen gekennzeichnet ist. Die intravaskuläre Hämolyse führt zu freiem Hämoglobin, das wiederum zu Schmerzen, Müdigkeit, Dysmotilität der Speiseröhre und erektiler Dysfunktion beitragen kann.

PNH ist auch durch Mutation im PIGA-Gen und Mangel an GPI-verknüpften Proteinen gekennzeichnet., Das Glykophosphoinositol (GPI) – Moiety ermöglicht die Anhaftung einer Reihe verschiedener Proteine an die Zellmembran. Für die Synthese der GPI-Anker sind mehr als 20 Gene erforderlich, von denen eines das PIGA-Gen auf dem X-Chromosom ist. Eine erworbene Mutation im einzelnen PIGA-Gen bei einem Männchen oder in einer Kopie bei einem Weibchen aufgrund einer X-Inaktivierung (Lyonisierung) reicht aus, um Defizite bei der Expression von GPI-verknüpften Proteinen zu erzeugen., Wenn diese Mutation in einer sich selbst replizierenden hämatologischen Stammzelle auftritt, kann die Erweiterung dieses PNH-Klons zu einer GPI-defizienten Zellpopulation führen, möglicherweise in allen hämatologischen Linien.

Frage 2. Warum wird die Durchflusszytometrie zur Diagnose von PNH verwendet?

Die Durchflusszytometrie ist empfindlicher und aussagekräftiger als die Mutationsanalyse. Durch gleichzeitige Auswertung verschiedener Zellpopulationen kann die Durchflusszytometrie die Größe des PNH-Klons in jeder der häufig betroffenen hämatopoetischen Zelllinien (Erythrozyten , Granulozyten und Monozyten) beurteilen.,1,2 Somit kann die Durchflusszytometrie bestimmen, ob der Patient eine reduzierte (partielle) Expression von GPI-Proteinen (dh PNH Typ II) oder eine vollständige Abwesenheit von GPI-Proteinen (dh PNH Typ III) aufweist. Patienten mit Typ III haben häufiger eine schwere Hämolyse, da das Fehlen von GPI-verbundenem CD55 RBCs empfindlicher für komplementvermittelte Lyse macht.

Frage 3. Was ist der Probentyp und die durchflusszytometrische Methode, die von Quest Diagnostics verwendet wird?

Peripheres Blut ist die einzige geeignete Probe für die Durchflusszytometrie PNH-Tests. Knochenmarkproben werden nicht empfohlen.,

Unser Test für PNH (Testcode 16433) ist ein hochempfindlicher Test, der die GPI-verknüpfte CD59 auf Erythrozyten bewertet. Es verwendet eine Kombination mehrerer GPI-verbundener Marker und des Pan-GPI-Liganden FLAER (fluoreszierendes Aerolysin) zur Beurteilung von Granulozyten und Monozyten. Zusätzliche Transmembranantigene werden verwendet, um die verschiedenen Zellpopulationen zu unterscheiden.

Frage 4. Was ist die Empfindlichkeit des Assays?

Die analytische Empfindlichkeit unseres Assays beträgt 0,01%; Es kann 1 GPI-defiziente Zelle in 10.000 Zellen erkennen., Eine ausreichende Hypozellularität, wie sie in aplastischen Fällen auftreten kann, kann jedoch die Empfindlichkeit einschränken. Wenn dies geschieht, wird es im Bericht angezeigt.

Frage 5. Welche Bedeutung hat die PNH-Klongröße bei der Diagnose?

Bei der Präsentation haben die meisten Patienten mit PNH einen dominanten PNH-Klon, der in 3 analysierten Linien nachweisbar ist. Der Grad der Hämolyse, die jeweilige PIGA-Mutation und die präsentierenden Symptome können jedoch die Klongröße beeinflussen., Kleine PNH-Klone (unter 5%) können auch mit myelodysplastischen Syndromen (MDS) und aplastischer Anämie assoziiert sein, so dass eine klinische Korrelation in diesen Studien, die einen kleinen PNH-Klon zeigen, unerlässlich ist.3

Frage 6. Nach der Diagnose, welches Intervall von Follow-up-Tests wird empfohlen?

Richtlinien empfehlen, die PNH-Klongröße in regelmäßigen Abständen zu überwachen.1 Wenn der Patient klinisch stabil ist, kann eine durchflusszytometrische Auswertung einmal im Jahr ausreichend sein. Wenn jedoch die Symptome erneut auftreten oder die Ergebnisse anderer Labortests ein Fortschreiten zeigen, werden häufigere Tests empfohlen., Die serielle Durchflusszytometrie ist besonders nützlich, um das Ansprechen nach Beginn der Eculizumab-Immuntherapie zu bestimmen.4

Bei Patienten mit aplastischer Anämie oder MDS mit niedrigem Grad und einem anfänglichen negativen PNH-Test kann ein Follow-up-Test zur Überwachung des Auftretens eines PNH-Klons angezeigt sein.

1. Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, et al. Richtlinien für die Diagnose und Überwachung von paroxsymaler nächtlicher Hämoglobinurie und verwandter Störungen durch Durchflusszytometrie. Cytometry B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,
2. Hernandez-Campo Uhr, Almeida J, Sanchez ML, et al. Normale Muster Derexpression von Glykosylphosphatidylinositol-verankerten Proteinen auf verschiedenen Teilmengen von peripherenblutzellen: ein Bezugsrahmen für die Diagnose von paroxysmaler nächtlicher Hämoglobinurie. Zytometrie. 2006;70B:71-81.
3. Wang H, Chuhjo T, Yasue S, et al. Klinische Bedeutung einer kleinen Population von paroxysmalen nächtlichen Hämoglobinurie-Zellen im Knochenmarkversagensyndrom. Blut. 2002;100:3897-3902.
4. Bergmenschen P, Young NS, Schubert J, et al., Der Komplement-Inhibitor Eculizumab bei paroxysmaler nächtlicher Hämoglobinurie. N Engl J Med. 2006;355:1233-1243.