Centro di educazione clinica (Italiano)

Domanda 1. Quali sono le caratteristiche cliniche e genetiche dell’emoglobinuria parossistica notturna (PNH)?

L’emoglobinuria parossistica notturna (EPN) è una malattia rara caratterizzata da emolisi cronica, aumento del rischio di trombosi venosa e insufficienza midollare. L’emolisi intravascolare si traduce in emoglobina libera, che, a sua volta, può contribuire al dolore, all’affaticamento, alla dismotilità esofagea e alla disfunzione erettile.

Il PNH è anche caratterizzato da mutazione nel gene PIGA e carenza di proteine legate al GPI., La porzione di glicofosfoinositolo (GPI) consente a un certo numero di proteine diverse di attaccarsi alla membrana cellulare. Ci sono più di 20 geni necessari per la sintesi delle ancore GPI, uno dei quali è il gene PIGA situato sul cromosoma X. Una mutazione acquisita nel singolo gene PIGA in un maschio, o in una copia in una femmina a causa dell’inattivazione X (lyonization), è sufficiente a produrre carenze nell’espressione delle proteine legate al GPI., Se questa mutazione si verifica in una cellula staminale ematologica auto-replicante, l’espansione di quel “clone” PNH può portare a una popolazione cellulare carente di GPI, potenzialmente in tutti i lignaggi ematologici.

Domanda 2. Perché la citometria a flusso viene utilizzata per diagnosticare la PNH?

La citometria a flusso è sensibile e più informativa dell’analisi delle mutazioni. Valutando simultaneamente diverse popolazioni cellulari, la citometria a flusso può valutare la dimensione del clone PNH in ciascuna delle linee cellulari ematopoietiche comunemente colpite (eritrociti , granulociti e monociti).,1,2 Pertanto, la citometria a flusso può determinare se il paziente ha ridotto l’espressione (parziale) delle proteine GPI (cioè, PNH di tipo II) o la completa assenza di proteine GPI (cioè, PNH di tipo III). I pazienti con tipo III hanno maggiori probabilità di avere emolisi grave, poiché l’assenza di CD55 GPI-linked rende i globuli rossi più sensibili alla lisi mediata dal complemento.

Domanda 3. Qual è il tipo di campione e il metodo citometrico di flusso utilizzato da Quest Diagnostics?

Il sangue periferico è l’unico campione appropriato per il test della citometria a flusso EPN. I campioni di midollo osseo non sono raccomandati.,

Il nostro test per l’EPN (test code 16433) è un test ad alta sensibilità che valuta il CD59 collegato al GPI sugli eritrociti. Utilizza una combinazione di diversi marcatori collegati a GPI e il ligando pan-GPI, FLAER (aerolisina fluorescente), per valutare granulociti e monociti. Ulteriori antigeni transmembrana sono utilizzati per distinguere le diverse popolazioni cellulari.

Domanda 4. Qual è la sensibilità del test?

La sensibilità analitica del nostro test è dello 0,01%; può rilevare 1 cellula carente di GPI in 10.000 cellule., Tuttavia, una sufficiente ipocellularità, come può verificarsi nei casi aplastici, può limitare la sensibilità. Quando ciò accade, verrà indicato sul rapporto.

Domanda 5. Qual è il significato della dimensione del clone PNH alla diagnosi?

Alla presentazione, la maggior parte dei pazienti con PNH avrà un clone dominante di PNH rilevabile in 3 lignaggi analizzati. Tuttavia, il grado di emolisi, la particolare mutazione PIGA e i sintomi che presentano possono influenzare la dimensione del clone., Piccoli cloni di EPN (inferiori al 5%) possono anche essere associati a sindromi mielodisplastiche (MDS) e anemia aplastica, quindi la correlazione clinica è essenziale in quegli studi che mostrano un piccolo clone di EPN.3

Domanda 6. Dopo la diagnosi, quale intervallo di test di follow-up è raccomandato?

Le linee guida raccomandano di monitorare la dimensione del clone dell’EPN a intervalli regolari.1 Se il paziente è clinicamente stabile, la valutazione citometrica di flusso una volta all’anno può essere sufficiente. Tuttavia, se i sintomi si ripresentano o i risultati di altri test di laboratorio dimostrano la progressione, si raccomandano test più frequenti., La citometria a flusso seriale è particolarmente utile per determinare la risposta dopo l’inizio dell’immunoterapia con eculizumab.4

Nei pazienti con anemia aplastica o MDS di basso grado e con un test iniziale negativo della EPN, può essere indicato un test di follow-up per monitorare l’insorgenza di un clone della EPN.

1. Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, et al. Linee guida per la diagnosi e il monitoraggio dell’emoglobinuria parossistica notturna e dei disturbi correlati mediante citometria a flusso. Citometria B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,
2. Hernandez-Campo PM, Almeida J, Sanchez ML, et al. Modelli normali diespressione di proteine ancorate al glicosilfosfatidilinositolo su diversi sottoinsiemi di cellule periferiche del sangue: un quadro di riferimento per la diagnosi di emoglobinuria notturna parossistica. Citometria. 2006; 70B: 71-81.
3. Wang H, Chuhjo T, Yasue S, et al. Significato clinico di una popolazione minore di cellule parossistiche notturne di tipo emoglobinuria nella sindrome da insufficienza midollare. Sangue. 2002;100:3897-3902.
4. Hillmen P, Young NS, Schubert J, et al., L’inibitore del complemento eculizumab in emoglobinuria parossistica notturna. N Ingl J Med. 2006;355:1233-1243.