Centro de Educação Clínica (Português)

Pergunta 1. Quais são as características clínicas e genéticas da hemoglobinúria paroxística nocturna (HPN)?

a hemoglobinúria paroxística nocturna (HPN) é uma doença rara caracterizada por hemólise crónica, risco aumentado de trombose venosa e insuficiência da medula óssea. A hemólise intravascular resulta em hemoglobina livre, que, por sua vez, pode contribuir para a dor, fadiga, dismotilidade esofágica, e disfunção eréctil.

PNH é também caracterizada por mutação no gene PIGA e deficiência em proteínas ligadas a GPI., A fracção glicofosfoinositol (GPI) permite a ligação de várias proteínas diferentes à membrana celular. Existem mais de 20 genes necessários para a síntese das âncoras GPI, um dos quais é o gene PIGA localizado no cromossomo X. Uma mutação adquirida no gene único PIGA num macho, ou numa cópia numa fêmea devido à inactivação do X (lionização), é suficiente para produzir deficiências na expressão de proteínas ligadas ao GPI., Se esta mutação ocorrer numa célula estaminal hematológica auto-replicante, a expansão desse “clone” de HPN pode levar a uma população de células deficientes em GPI, potencialmente em todas as linhagens hematológicas.Pergunta 2. Por que a citometria de fluxo é usada para o diagnóstico de HPN?a citometria de fluxo é sensível e mais informativa do que a análise de mutação. Ao avaliar simultaneamente diferentes populações celulares, a citometria de fluxo pode avaliar o tamanho do clone de HPN em cada uma das linhagens celulares hematopoiéticas comumente afetadas (eritrócitos , granulócitos e monócitos).,1,2 Thus, flow citometry can determine whether the patient has reduced (partial) expression of GPI proteins (ie, PNH type II) or complete absence of GPI proteins (ie, PNH type III). Pacientes com tipo III são mais propensos a ter hemólise grave, uma vez que a ausência de CD55 ligado a GPI torna os RCS mais sensíveis à lise mediada pelo complemento.quanto à terceira questão Qual é o tipo de amostra e método citométrico de fluxo utilizado pelo diagnóstico Quest?

o sangue periférico é a única amostra apropriada para o teste de HPN por citometria de fluxo. Não são recomendadas amostras de medula óssea.,

o nosso ensaio para a HPN (código de ensaio 16433) é um ensaio de sensibilidade elevada que avalia o CD59 ligado a GPI nos eritrócitos. Ele usa uma combinação de vários marcadores ligados a GPI e o ligando pan-GPI, FLAER (aerolisina fluorescente), para avaliar granulócitos e monócitos. São utilizados antigénios transmembranares adicionais para distinguir as diferentes populações celulares.quanto à quarta questão Qual é a sensibilidade do ensaio?

a sensibilidade analítica do nosso ensaio é de 0,01%; pode detectar 1 célula com deficiência de GPI em 10 000 células., No entanto, hipocelularidade suficiente, como pode ocorrer em casos aplásticos, pode limitar a sensibilidade. Quando isso acontecer, será indicado no relatório.Pergunta 5. Qual é o significado do tamanho dos clones PNH no diagnóstico?

na apresentação, a maioria dos pacientes com HPN terá um clone PNH dominante detectável em 3 linhagens analisadas. No entanto, o grau de hemólise, a mutação particular da PIGA, e os sintomas apresentados podem influenciar o tamanho do clone., Pequenos clones da HPN (abaixo de 5%) também podem ser associados com síndromes mielodisplásicas (SMD) e anemia aplástica, então a correlação clínica é essencial nesses estudos mostrando um pequeno clone da HPN.Quanto à sexta questão Após o diagnóstico, que intervalo de testes de acompanhamento é recomendado?

Guidelines recommend monitoring the PNH clone size at regular intervalos.Se o doente for clinicamente estável, pode ser suficiente uma avaliação citométrica do fluxo uma vez por ano. No entanto, se os sintomas reaparecerem ou os resultados de outros testes laboratoriais demonstrarem progressão, recomenda-se a realização de testes mais frequentes., A citometria de fluxo Serial é particularmente útil para determinar a resposta após o início da imunoterapia com eculizumab.4

em doentes com anemia aplástica ou MDS de baixo grau e um teste inicial negativo de HPN, podem ser indicados testes de seguimento para monitorizar o aparecimento de um clone da HPN.

1. Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, et al. Guidelines for the diagnostic and monitoring of paroxsymal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by flow citometry. Citometria B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,Hernandez-Campo PM, Almeida J, Sanchez ML, et al. Padrões normais de expressão de proteínas ancoradas em glicosilfosfatidilinositol em diferentes subconjuntos de células de sangue periférico: um quadro de referência para o diagnóstico da hemoglobinúria paroxística nocturna. Citometria. 2006; 70B: 71-81.Wang H, Chuhjo T, Yasue S, et al. Significado clínico de uma pequena população de células do tipo hemoglobinúria paroxística nocturna na síndrome de insuficiência da medula óssea. Sangue. 2002;100:3897-3902.Hillmen P, Young NS, Schubert J, et al., O inibidor do complemento eculizumab na hemoglobinúria paroxística nocturna. N Engl J Med. 2006;355:1233-1243.