Klinisk Utbildning Center

Fråga 1. Vilka är de kliniska och genetiska egenskaperna hos paroxysmal nattlig hemoglobinuri (PNH)?

Paroxysmal nattlig hemoglobinuri (PNH) är en sällsynt sjukdom som kännetecknas av kronisk hemolys, ökad risk för venös trombos och benmärgssvikt. Intravaskulär hemolys resulterar i fritt hemoglobin, vilket i sin tur kan bidra till smärta, trötthet, esofagusdysmotilitet och erektil dysfunktion.

PNH kännetecknas också av mutation i PIGA-genen och brist i GPI-länkade proteiner., Glykofosfoinositol (GPI) – delen tillåter ett antal olika proteiner att fästa vid cellmembranet. Det finns mer än 20 gener som krävs för syntes av GPI-ankare, varav en är PIGA-genen som ligger på X-kromosomen. En förvärvad mutation i den enda PIGAGENEN hos en man, eller i en kopia hos en kvinna på grund av X-inaktivering (lyonisering), är tillräcklig för att producera brister i uttrycket av GPI-länkade proteiner., Om denna mutation uppträder i en självreplikerande hematologisk stamcell kan expansion av den PNH ”klonen” leda till en GPI-bristfällig cellpopulation, potentiellt i alla hematologiska linjer.

fråga 2. Varför används flödescytometri för att diagnostisera PNH?

flödescytometri är känslig och mer informativ än mutationsanalys. Genom att samtidigt utvärdera olika cellpopulationer kan flödescytometri bedöma storleken på PNH-klonen i var och en av de vanligen drabbade hematopoetiska celllinjerna (erytrocyter , granulocyter och monocyter).,1,2 således kan flödescytometri avgöra om patienten har minskat (delvis) uttryck av GPI-proteiner (dvs PNH typ II) eller fullständig frånvaro av GPI-proteiner (dvs PNH typ III). Patienter med typ III är mer benägna att ha svår hemolys, eftersom frånvaron av GPI-länkad CD55 gör RBC mer känslig för komplementmedierad Lys.

fråga 3. Vad är provtypen och flödescytometrisk metod som används av Quest Diagnostics?

perifert blod är det enda lämpliga provet för flödescytometri PNH-testning. Benmärgsprover rekommenderas inte.,

vårt test för PNH (testkod 16433) är en högkänslighetsanalys som bedömer GPI-länkade CD59 på erytrocyter. Det använder en kombination av flera GPI-länkade markörer och pan-GPI-ligand, FLAER (fluorescerande aerolysin), för att bedöma granulocyter och monocyter. Ytterligare transmembranantigener används för att skilja de olika cellpopulationerna.

fråga 4. Vad är analysens känslighet?

analysens känslighet är 0,01%; den kan detektera 1 GPI-bristfällig cell i 10 000 celler., Tillräcklig hypocellularitet, som kan förekomma i aplastiska fall, kan dock begränsa känsligheten. När detta händer kommer det att anges i rapporten.

fråga 5. Vad är betydelsen av PNH-klonstorleken vid diagnos?

vid presentation kommer de flesta patienter med PNH att ha en dominerande PNH-klon detekterbar i 3 analyserade linjer. Graden av hemolys, den speciella PIGAMUTATIONEN och de presenterande symtomen kan dock påverka klonstorleken., Små PNH kloner (under 5%) kan också vara förknippat med myelodysplastiskt syndrom (MDS) och aplastisk anemi, så klinisk korrelation är viktiga i de studier som visar en liten PNH-klon.3

Fråga 6. Efter diagnos rekommenderas vilket intervall av uppföljningstest?

riktlinjer rekommenderar övervakning av PNH-klonstorleken med jämna mellanrum.1 om patienten är kliniskt stabil kan flödescytometrisk utvärdering en gång per år vara tillräcklig. Om symtomen återkommer eller resultaten från andra laboratorietester visar progression rekommenderas dock mer frekvent testning., Seriell flödescytometri är särskilt användbar för att bestämma svaret efter initiering av eculizumab immunterapi.4

hos patienter med aplastisk anemi eller låggradig MDS och ett initialt negativt PNH-test kan uppföljningstest för att övervaka uppkomsten av en PNH-klon vara indicerat.

1. Borowitz mj, Craig FE, DiGiuseppe JA, et al. Riktlinjer för diagnos och övervakning av paroxsymal nattlig hemoglobinuri och relaterade störningar genom flödescytometri. Cytometry B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,
2. Hernandez-Campo PM, Almeida J, Sanchez ML, et al. Normala mönster avuttryck av glykosylfosfatidylinositol-förankrade proteiner på olika delmängder av periferblodceller: en referensram för diagnos av paroxysmal nattlig hemoglobinuri. Cytometri. 2006;70B:71-81.
3. Wang H, Chuhjo T, Yasue S, et al. Klinisk betydelse av en mindre population av paroxysmal nattlig hemoglobinuri-typceller i benmärgssvikt syndrom. Blod. 2002;100:3897-3902.
4. Hillmen P, Unga NS, Schubert, J, et al., Komplementhämmaren eculizumab i paroxysmal nattlig hemoglobinuri. N Engl J Med. 2006;355:1233-1243.