Întrebarea 1. Care sunt caracteristicile clinice și genetice ale hemoglobinuriei paroxistice nocturne (PNH)? hemoglobinuria paroxistică nocturnă (PNH) este o afecțiune rară caracterizată prin hemoliză cronică, risc crescut de tromboză venoasă și insuficiență a măduvei osoase. Hemoliza intravasculară are ca rezultat hemoglobina liberă, care, la rândul său, poate contribui la durere, oboseală, dismotilitate esofagiană și disfuncție erectilă.PNH este, de asemenea, caracterizat prin mutație în gena PIGA și deficiență în proteinele legate de GPI., Partea de glicofosfoinozitol (GPI) permite unui număr de proteine diferite să se atașeze la membrana celulară. Există mai mult de 20 de gene necesare pentru sinteza ancorelor GPI, dintre care una este gena PIGA localizată pe cromozomul X. O mutație dobândită în gena unică PIGA la un bărbat sau într-o copie la o femeie din cauza inactivării X (lyonizare) este suficientă pentru a produce deficiențe în exprimarea proteinelor legate de GPI., Dacă această mutație apare într-o celulă stem hematologică auto-replicantă, extinderea acelei „clone” PNH poate duce la o populație de celule cu deficit de GPI, potențial în toate liniile hematologice.
întrebarea 2. De ce se utilizează citometria în flux pentru diagnosticarea PNH?
citometria în flux este sensibilă și mai informativă decât analiza mutației. Prin evaluarea simultană a diferitelor populații de celule, citometria în flux poate evalua dimensiunea clonei PNH în fiecare dintre liniile de celule hematopoietice afectate în mod obișnuit (eritrocite , granulocite și monocite).,1,2 astfel, citometria de flux poate determina dacă pacientul are o expresie redusă (parțială) a proteinelor GPI (adică PNH tip II) sau absența completă a proteinelor GPI (adică PNH tip III). Pacienții cu tip III sunt mai susceptibili de a avea hemoliză severă, deoarece absența CD55 legată de GPI face ca RBC-urile să fie mai sensibile la liza mediată de complement.
întrebarea 3. Care este tipul eșantionului și metoda citometrică de flux utilizată de Quest Diagnostics?
sângele periferic este singura probă adecvată pentru testarea PNH a citometriei de flux. Probele de măduvă osoasă nu sunt recomandate.,testul nostru pentru PNH (cod de testare 16433) este un test de sensibilitate ridicată care evaluează CD59 legat de GPI pe eritrocite. Utilizează o combinație de mai mulți markeri legați de GPI și ligandul pan-GPI, FLAER (aerolizină fluorescentă), pentru a evalua granulocitele și monocitele. Antigeni transmembranari suplimentari sunt utilizați pentru a distinge diferitele populații de celule.
întrebarea 4. Care este sensibilitatea testului? sensibilitatea analitică a testului nostru este de 0,01%; poate detecta 1 celulă cu deficit de GPI în 10.000 de celule., Cu toate acestea, hipocelularitatea suficientă, așa cum se poate întâmpla în cazuri aplastice, poate limita sensibilitatea. Când se întâmplă acest lucru, acesta va fi indicat în raport.
Întrebarea 5. Care este semnificația dimensiunii clonei PNH la diagnostic?
la prezentare, majoritatea pacienților cu HPN vor avea o clonă PNH dominantă detectabilă în 3 linii analizate. Cu toate acestea, gradul de hemoliză, mutația PIGA particulară și simptomele care prezintă pot influența dimensiunea clonei., Clonele PNH mici (sub 5%) pot fi, de asemenea, asociate cu sindroamele mielodisplazice (SMD) și anemia aplastică, astfel încât corelația clinică este esențială în acele studii care arată o clonă PNH mică.3
întrebarea 6. După diagnosticare, ce interval de testare ulterioară este recomandat?
ghidurile recomandă monitorizarea dimensiunii clonei PNH la intervale regulate.1 dacă pacientul este stabil din punct de vedere clinic, evaluarea citometrică a fluxului o dată pe an poate fi suficientă. Cu toate acestea, dacă simptomele reapar sau rezultatele altor teste de laborator demonstrează progresia, se recomandă testarea mai frecventă., Citometria fluxului Serial este deosebit de utilă pentru determinarea răspunsului după inițierea imunoterapiei cu eculizumab.4
la pacienții cu anemie aplastică sau MDS de grad scăzut și un test inițial negativ PNH, pot fi indicate teste de urmărire pentru monitorizarea apariției unei clone PNH.
- Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, și colab. Ghid pentru diagnosticarea și monitorizarea hemoglobinuriei nocturne paroximale și a tulburărilor asociate prin citometrie de flux. Citometrie B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,
- Hernandez-Campo PM, Almeida J, Sanchez ML, și colab. Modele normale ofexpression de glycosylphosphatidylinositol-proteine ancorate pe diferite subseturi de peripheralblood celule: un cadru de referință pentru diagnosticul de hemoglobinurie paroxistica nocturna. Citometrie. 2006; 70B: 71-81.
- Wang H, Chuhjo T, Yasue S, și colab. Semnificația clinică a unei populații minore de celule paroxistice nocturne de tip hemoglobinurie în sindromul insuficienței măduvei osoase. Sânge. 2002;100:3897-3902.
- Hillmen P, Young NS, Schubert J, și colab., Inhibitorul complementului eculizumab în hemoglobinuria paroxistică nocturnă. În Engl J Med. 2006;355:1233-1243.
Leave a Reply