centrum klinického vzdělávání (Čeština)

Otázka 1. Jaké jsou klinické a genetické rysy paroxysmální noční hemoglobinurie (PNH)?

paroxysmální noční hemoglobinurie (PNH) je vzácná porucha charakterizovaná chronickou hemolýzou, zvýšeným rizikem žilní trombózy a selháním kostní dřeně. Intravaskulární hemolýza má za následek volný hemoglobin, který zase může přispět k bolesti, únavě, dysmotilitě jícnu a erektilní dysfunkci.

PNH je také charakterizován mutací v genu PIGA a nedostatkem proteinů vázaných na GPI., Část glykofosfoinositolu (GPI) umožňuje připojení řady různých proteinů k buněčné membráně. Existuje více než 20 genů potřebných pro syntézu kotvů GPI, z nichž jeden je gen PIGA umístěný na chromozomu X. Získaná mutace v jediném genu PIGA u muže nebo v jedné kopii u ženy v důsledku inaktivace X (lyonizace) postačuje k produkci nedostatků v expresi proteinů vázaných na GPI., Pokud se tato mutace vyskytne v samoreplikující se hematologické kmenové buňce, expanze tohoto „klonu“ PNH může vést k populaci buněk s deficitem GPI, potenciálně ve všech hematologických liniích.

Otázka 2. Proč se k diagnostice PNH používá průtoková cytometrie?

průtoková cytometrie je citlivá a informativnější než mutační analýza. Současným hodnocením různých buněčných populací může průtoková cytometrie posoudit velikost klonu PNH v každé z běžně postižených linií hematopoetických buněk (erytrocyty , granulocyty a monocyty).,1,2 průtoková cytometrie tak může určit, zda má pacient sníženou (částečnou) expresi GPI proteinů (tj. Pacienti s typem III mají větší pravděpodobnost těžké hemolýzy, protože absence CD55 vázané na GPI činí RBC citlivější na lýzu zprostředkovanou komplementem.

Otázka 3. Jaký je typ vzorku a průtoková cytometrická metoda používaná Quest Diagnostics?

periferní krev je jediným vhodným vzorkem pro testování průtokové cytometrie PNH. Vzorky kostní dřeně se nedoporučují.,

náš test na PNH (testovací kód 16433) je test s vysokou citlivostí, který hodnotí CD59 vázaný na GPI na erytrocytech. Používá kombinaci několika GPI-vázaných markerů a pan-GPI ligand, FLAER (fluorescenční aerolysin), pro hodnocení granulocytů a monocytů. Další transmembránové antigeny se používají k rozlišení různých buněčných populací.

otázka 4. Jaká je citlivost testu?

analytická citlivost našeho testu je 0,01%; dokáže detekovat 1 buňku s nedostatkem GPI v 10 000 buňkách., Dostatečná hypokelularita, jak se může objevit v aplastických případech, však může omezit citlivost. Když k tomu dojde, bude to uvedeno ve zprávě.

otázka 5. Jaký je význam velikosti klonu PNH při diagnostice?

při prezentaci bude mít většina pacientů s PNH dominantní klon PNH detekovatelný ve 3 analyzovaných liniích. Stupeň hemolýzy, konkrétní mutace PIGA a prezentující se příznaky však mohou ovlivnit velikost klonu., Malé klony PNH (pod 5%) mohou být také spojeny s myelodysplastickými syndromy (MDS) a aplastickou anémií, takže klinická korelace je nezbytná v těch studiích, které ukazují malý klon PNH.3

otázka 6. Po diagnóze se doporučuje jaký interval následného testování?

pokyny doporučují pravidelně sledovat velikost klonu PNH.1 pokud je pacient klinicky stabilní, může postačovat průtokové cytometrické hodnocení jednou ročně. Pokud se však příznaky opakují nebo výsledky jiných laboratorních testů prokazují progresi, doporučuje se častější testování., Sériová průtoková cytometrie je zvláště užitečná pro stanovení odpovědi po zahájení imunoterapie ekulizumabem.4

u pacientů s aplastickou anémií nebo nízkým stupněm MDS a počátečním negativním PNH testem může být indikováno následné testování pro sledování výskytu klonu PNH.

1. Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, et al. Pokyny pro diagnostiku a monitorování paroxsymální noční hemoglobinurie a souvisejících poruch průtokovou cytometrií. Cytometrie B Clin Cytom. 2010;78:211-230.,
2. Hernandez-Campo PM, Almeida J, Sanchez ML, et al. Normální vzorkyexprese glykosylfosfatidylinositolu-ukotvených proteinů na různých podskupinách periferníchkrevní buňky: referenční rámec pro diagnostiku paroxysmální noční hemoglobinurie. Cytometrie. 2006; 70B: 71-81.
3. Wang H, Chuhjo T, Yasue s, et al. Klinický význam menší populace paroxysmálních nočních buněk hemoglobinurie typu u syndromu selhání kostní dřeně. Krev. 2002;100:3897-3902.
4. Hillmen P, Young NS, Schubert J, et al., Inhibitor komplementu ekulizumab v paroxysmální noční hemoglobinurii. N Engl J Med. 2006;355:1233-1243.