dzielenie się jest troskliwe!
(aktualizacja 6/07/2020)
Ten artykuł obejmuje
czym jest hemocytometr
hemocytometr jest urządzeniem komorowym przeznaczonym pierwotnie do liczenia komórek krwi (nazwa „Hemo” oznacza krew). Hemocytometr jest jak gruby szkiełko próbki z wygrawerowaną siatką., Gdy coverslip jest umieszczony na hemocytometr, coverslip utrzymywała próbkę w określonej wysokości (zazwyczaj 0,1 mm).
siatka ma również określone wymiary, dlatego można obliczyć objętość w komorze. Ponieważ można policzyć liczbę komórek w obszarze siatek i objętość jest znana, stężenie komórek w próbce można łatwo określić. Poniżej znajduje się ilustracja hemocytometru.,
jak używać hemocytometru do liczenia komórek
- przygotowanie próbki
dobrze wymieszanie próbki przed pobraniem próbek. Unikaj grudek.
- dokonując odpowiednich rozcieńczeń
stężenie komórek nie powinno być zbyt wysokie ani zbyt niskie. Jeśli stężenie komórek jest zbyt wysokie, trudno jest policzyć komórki wizualnie pod mikroskopem. Jeśli stężenie komórek jest zbyt niskie, musisz policzyć więcej kwadratów i być może więcej razy, aby uniknąć błędów statystycznych., Jeśli stężenie komórek jest zbyt wysokie, spróbuj zrobić 1:10, 1:100, 1:1000 rozcieńczenia szeregowe (patrz ilustracja poniżej).
- wprowadzenie zawieszenia komórek
umieszczenie coverslip na powierzchni liczenia. Wprowadzić zawiesinę komórki (10 µL lub jedną kroplę) z krawędzi coverslip za pomocą pipety transferowej z drobnymi końcówkami. Siła kapilarna przeciągnie ciecz, aby wypełnić obszar pod coverslip. Należy wprowadzić wystarczającą ilość płynu, aby powierzchnia liczenia była po prostu pokryta.,
- liczenie komórek
za pomocą mikroskopu skup się na liniach siatki obszaru zliczania z obiektywem 5-10x. Policz komórki w jednym zestawie 16 kwadratów (1×1 mm kwadratowy obszar; niebieski obszar). Powinieneś ustawić zasadę liczenia.
na przykład policz komórki na górnej i lewej linii kwadratu( zaznaczonej zieloną linią), ale nie licz komórek na dolnej i prawej linii kwadratu (zaznaczonej czerwoną linią). Przenieść hemocytometr do następnego zestawu 16 narożników i kontynuować liczenie, aż wszystkie 4 zestawy 16 kwadratów zostaną policzone., Weźmy na przykład poniższe zdjęcie, liczby komórek 4 zestawów 16 kwadratów to odpowiednio 3, 5, 6, 4. Dlatego średnia liczba komórek tego liczenia wynosi (3+5+6+4)/4 = 4.5
- Obliczanie stężenia komórek
aby obliczyć liczbę komórek na mL: weź średnią liczbę komórek z każdego z zestawów 16 kwadratów narożnych. Pomnóż przez 10,000. Ostateczną wartością jest liczba komórek / mL w pierwotnej zawiesinie komórek, jeśli nie ma rozcieńczenia. W tym przypadku średnia liczba komórek obliczona powyżej wynosi 4,5, a następnie pomnóż przez 10 000., Dlatego 4,5 * 10 000 = 45 000. Stężenie wynosi 45 000 komórek / mL. Jeśli jest to rozcieńczenie 10-krotne, należy pomnożyć je przez 10; doprowadzić je z powrotem do 450 000 komórek/mL.
można również zobaczyć demo video tutaj.
jak za pomocą hemocytometru określić żywotność komórek
błękit Trypanowy jest barwnikiem używanym do rozróżniania żywych i martwych komórek. Jest to istotna plama, która nie jest wchłaniana przez zdrowe, żywotne komórki, ale plamy komórek z uszkodzoną błoną komórkową. Dlatego tylko martwe komórki mogą być zabarwione na niebiesko i można je zobaczyć pod mikroskopem., Metoda ta jest określana jako metoda wykluczenia barwnika.
aby określić żywotność komórek, używamy tej samej metody, co zliczanie komórek. Jedyną różnicą jest to, że należy zmieszać zawiesinę komórkową z niebieskim barwnikiem Trypan przed wprowadzeniem zawiesiny komórkowej do hemocytometru. Zaczynajmy!
1. Dokonywanie odpowiednich rozcieńczeń
tak jak to omówiliśmy powyżej, odpowiednie rozcieńczenia ułatwią Ci liczenie. Zbyt dużo lub zbyt mało komórek nie jest dobre do liczenia.
2., Mieszając jednakową objętość zawiesiny komórkowej i barwnika Trypan blue
stężenie błękitu Trypan wynosi 0,4% (m / m). Stężenie robocze wynosi 0,2%, dlatego mieszamy jednakową objętość zawiesiny komórkowej z równą objętością 0,4% błękitu Trypanowego. Pamiętaj, że stężenie komórek jest teraz rozcieńczone 2 razy!
3. Wprowadzenie zawiesiny komórek
Umieść osłonę na powierzchni liczenia. Wprowadzić zawiesinę komórki (10 µL lub jedną kroplę) z krawędzi coverslip za pomocą pipety transferowej z drobnymi końcówkami. Poczekaj 1 min, aby komórki się osiedliły.
4., Liczenie żywotności komórek
za pomocą mikroskopu, skup się na liniach siatki obszaru zliczania z obiektywem 5-10x. Teraz widać, że niektóre komórki są przezroczyste, błyszczące, o okrągłym i gładkim kształcie. Są to zdrowe i żywe komórki. Widać również, że niektóre komórki są niebieskie w środku, z bardzo szorstkim zarysem w swoim kształcie. To niezdrowe i martwe komórki. Po upewnieniu się, że je rozróżniasz, możesz zacząć liczyć liczbę żywych komórek i martwych komórek.
weźmy przykład z poniższego zdjęcia.
liczba żywych komórek (białych) wynosi (2, 5, 5, 3) w 4 jasnoniebieskich kwadratach.,
średnia liczba żywych komórek wynosi (2+5+5+3)/4 = 3.75.
liczba martwych komórek (niebieskich) wynosi (1, 0, 1, 1) W 4 jasnoniebieskich kwadratach.
średnia liczba martwych komórek wynosi (1+0+1+1)/4 = 0.75
zatem żywotność komórek oblicza się jako:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, czyli 83%.
zastosowania Hemocytometru
oszacuj rozmiar komórki
ponieważ siatka ma określony wymiar, niektóre linie są 0,25 mm pomiędzy; niektóre linie są 0.,05 mm pomiędzy(patrz rysunek poniżej). Dlatego można łatwo oszacować rozmiar komórek. Jeśli chcesz dokładniej określić rozmiar komórki, możesz zrobić zdjęcie obrazu pod mikroskopem. Następnie użyj oprogramowania, takiego jak image J, gdzie możesz powiedzieć oprogramowaniu „stała długość jest równa 1 mm”. Przekonwertuje i oblicza rozmiar komórki dla Ciebie.
wykonaj morfologię krwi
hemocytometr początkowo był przeznaczony do morfologii krwi., Nasza krew składa się z czerwonych krwinek, białych krwinek i płytek krwi. Numer komórki i skład każdego typu komórki może powiedzieć lekarzowi stan zdrowia organizmu. Na przykład, niska liczba czerwonych krwinek powoduje uczucie zmęczenia i osłabienia (niedokrwistość). Wzrost liczby białych krwinek może wskazywać na infekcję, alergię, stan zapalny lub inne choroby. Dlatego hemocytometr jest bardzo ważnym narzędziem w laboratorium badań medycznych ze względu na jego zdolność do liczenia liczby komórek i składu każdego typu komórki.,
wykonaj liczbę komórek do hodowli komórkowej
Kiedy hoduję komórki w laboratorium, muszę zmieniać podłoże komórkowe co kilka dni (zależy od tego, jak szybko rosną komórki). Po tym, jak przylegające komórki rosną, zajmując 95% powierzchni naczynia, nadszedł czas na” przejście ” komórek do innego naczynia. To, co robimy, to odłączanie komórek, tworzenie jednorodnej zawiesiny i liczenie liczby komórek. Liczba komórek jest bardzo ważna dla hodowli komórkowej. Komórki mogą nie rosnąć zbyt dobrze lub umierać, jeśli masz zbyt mało komórek w naczyniu. W związku z tym zdolność do liczenia liczby komórek jest podstawową umiejętnością dla kultury komórkowej.,
gdzie kupić hemocytometr
W Amazon można znaleźć różne hemocytometry o różnych przedziałach cenowych i cechach. RS 'Science oferuje również” wszystko w jednym zestawie”, który jest wyposażony w hemocytometr, coverslip, błękit Trypanowy i błękit metylenowy do oceny żywotności komórek i fiolek z próbkami, pipety transferowe z drobnymi końcówkami, broszurę z papierem soczewkowym. Wszystko, czego potrzebujesz, aby zacząć, znajduje się w jednym zestawie.
Leave a Reply