Sharing is caring!
(oppdatering 6/07/2020)
Denne artikkelen dekker
Hva er en hemocytometer
hemocytometer er en telle kammer enheten som opprinnelig ble designet for telling av blodceller (navnet «hemo» betyr blod). Hemocytometer er som en tykk objektglasset med et rutenett gravert på det., Når dekkglasset er plassert på hemocytometer, dekkglasset holdt eksempel i en bestemt høyde (vanligvis 0,1 mm).
nettet har også spesifikke mål, derfor volumet i kammeret kan beregnes. Siden du kan telle antall celler i området av nett og volumet er kjent, konsentrasjon av celler i utvalget kan bestemmes lett. Nedenfor er en illustrasjon av en hemocytometer.,
Hvordan å bruke en hemocytometer å telle celler
- Utarbeide eksempel
å Blande eksempel godt før du tar prøvene. Unngå klumper.
- for å Lage passende fortynninger
konsentrasjonen av celler bør ikke være for høy eller for lav. Hvis cellen konsentrasjonen er for høy, er det vanskelig å telle celler visuelt under mikroskopet. Hvis cellen konsentrasjonen er for lav, må du telle mer torg og kanskje flere ganger for å unngå den statistiske feil., Hvis cellen konsentrasjonen er for høy, kan du prøve å gjøre 1:10, 1:100, 1:1000 serielle fortynninger (se illustrasjonen nedenfor).
- Innføre cellesuspensjon
Sted dekkglasset over telle overflaten. Innføre cellesuspensjon (10 µL eller en dråpe) fra kanten av dekkglasset med et fint tips overføringspipetten. Kapillære kraft vil dra væske for å fylle området under dekkglasset. Nok væske bør innføres, slik at den teller overflaten er bare dekket.,
- Telle celler
ved Hjelp av et mikroskop, fokus på linjene i rutenettet av tellende areal med en 5-10x mål. Telle celler i et sett av 16 kvadrater (1×1 mm square-området; det blå området). Du bør sette en tellemåten.
For eksempel, telle celler på toppen og venstre linjer av et kvadrat (markert med grønn linje), men ikke telle celler på bunnen og rettigheter linjer av et kvadrat (merket med en rød linje). Flytte hemocytometer til neste sett av 16 hjørne torg og fortsette å telle til alle 4 sett av 16 rutene er regnet med., Ta bildet nedenfor som et eksempel, celle tall av 4 sett av 16 rutene er 3, 5, 6, 4, henholdsvis. Derfor, den gjennomsnittlige celle nummer av denne telling (3+5+6+4)/4 = 4.5
- for å Beregne konsentrasjonene
for Å beregne antall celler per mL: Ta den gjennomsnittlige celletall fra hvert av settene av 16 hjørne torg. Multipliser med 10 000. Den siste verdien er antall celler/mL i den opprinnelige cellen suspensjon dersom det er ingen utvanning. I dette tilfellet, den gjennomsnittlige celle nummer du beregnet ovenfor er 4,5, og deretter multiplisere med 10 000., Derfor, 4.5*10,000 = 45,000. Konsentrasjonen er 45,000 celler/mL. Hvis dette er en 10 ganger fortynning, vil du trenger å multiplisere med 10; bringe det tilbake til av 450 000 celler/mL.
Du kan også se en demo video her.
Hvordan å bruke en hemocytometer å finne ut celleviabilitet
Trypan blå er en farge som brukes til å skille mellom levende og døde celler. Det er en viktig flekker som ikke er absorbert av sunn levedyktige celler, men flekker celler med en skadet celle membranen. Derfor, bare døde celler kan være farget blå og kan sees under mikroskopet., Denne metoden er referert til som fargestoff utelukkelse metode.
for Å finne celleviabilitet, bruker vi samme metode som celle teller. Den eneste forskjellen er at du trenger å blande cellesuspensjon med Trypan blått fargestoff før innføring cellesuspensjon til hemocytometer. La oss starte!
1. Å lage passende fortynninger
Liker hva vi har diskutert ovenfor, passende fortynninger vil gjøre dine telle livet enklere. For mye eller for lite av celler er ikke bra for telling.
2., Å blande like volum av cellesuspensjon, og at Trypan blått fargestoff
konsentrasjonen av Trypan blå er 0,4% (w/w). De arbeider konsentrasjon er 0,2%, som er grunnen til at vi blander likt volum av cellesuspensjon med et likt volum på 0,4% Trypan blå. Husk at dine konsentrasjonene nå er utvannet 2 brett!
3. Innføring cellesuspensjon
Sted dekkglasset over telle overflaten. Innføre cellesuspensjon (10 µL eller en dråpe) fra kanten av dekkglasset med et fint tips overføringspipetten. Vent 1 min tillater celler å bosette seg.
4., Telling av celleviabilitet
ved Hjelp av et mikroskop, fokus på linjene i rutenettet av tellende areal med en 5-10x mål. Nå kan du se noen celler er gjennomsiktige, blanke, med rund og jevn form. Disse er sunt og levende celler. Du kan også se noen celler er blå inni, med en veldig grov skisse i sin form. Disse er usunn og døde celler. Etter at du er sikker på å skille dem, kan du begynne å telle antallet av levende celler og døde celler.
La oss ta et eksempel på bildet nedenfor.
grevene av levende celler (hvite celler) er (2, 5, 5, 3) i 4 lys blå firkanter.,
Den gjennomsnittlige tellinger av levende celler er (2+5+5+3)/4 = 3.75.
grevene av døde celler (blå celler) er (1, 0, 1, 1) i 4 lys blå firkanter.
Den gjennomsnittlige tellinger av døde celler er (1+0+1+1)/4 = 0.75
Derfor celleviabilitet er beregnet som:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, som er 83%.
Hemocytometer programmer
Estimere celle størrelse
Fordi nettet har en bestemt dimensjon, noen linjer er 0,25 mm i mellom, og noen linjer er 0.,05 mm i mellom (se bildet nedenfor). Du kan derfor enkelt å estimere størrelsen på cellene. Hvis du ønsker å finne ut cellestørrelse mer presist, kan du ta et bilde av bildet under mikroskopet. Deretter, bruke programvare som bilde J, hvor du kan fortelle programvaren «en fast lengde er lik 1 mm». Det vil konvertere fra, og beregne celle størrelse for deg.
Utføre en blod celle teller
hemocytometer i utgangspunktet var designet for blodprøve., Blodet består av Røde blodlegemer, Hvite blodlegemer, og Blodplater. Cellen antall og sammensetning av hver celle-type kan fortelle legen din kropp helse tilstand. For eksempel, lavt antall Røde blodlegemer fører til følelse av tretthet og svakhet (anemi). En økning i antall Hvite blodceller kan indikere infeksjon, allergi, betennelse eller andre sykdommer. Derfor, en hemocytometer er et svært viktig verktøy i medisinsk test lab på grunn av sin evne til å telle antall celler og sammensetningen av hver celle-type.,
Utføre celletall for cellekultur
Når jeg blir celler i laboratoriet, jeg trenger å endre celle-medium annenhver dag (avhenger av hvor fort cellene vokse). Etter tilhenger celler vokse seg til å dekke 95% av overflaten på et fat, er det på tide å «passage» celler til en annen tallerken. Hva vi gjør er å koble celler, gjør en homogen suspensjon, og teller antall celler. Antall celler er svært viktig for celle kultur. Cellene kan ikke vokse svært godt eller dø hvis du har for få celler i en skål. Derfor, evne til å telle celle nummer er en grunnleggende ferdighet for cellekultur.,
der Hvor å kjøpe et hemocytometer
Amazon er et godt sted å begynne. Du kan finne en rekke hemocytometers med forskjellige prisklasser og kvaliteter på Amazon. Rs’ Vitenskap tilbyr også en «alt-i-ett kit», som kommer med en hemocytometer, dekkglass, Trypan Blå og Methylene Blå for å vurdere celleviabilitet og prøve hetteglass, fine tips overføre pipetter, linsepapir hefte. Alle de tingene du trenger for å komme i gang er i en kit.
Leave a Reply