sdílení se stará!
(aktualizace 6/07/2020)
Tento článek se vztahuje
Co je hemocytometer
hemocytometer je počítání komora zařízení původně určené pro počítání krevních buněk (název „krve“ znamená krev). Hemocytometer je jako tlustý vzorek s mřížkou vyrytou na něm., Když je krytina umístěna na hemocytometru, krytina držela vzorek v určité výšce (typicky 0,1 mm).
mřížka má také specifické rozměry, proto lze vypočítat objem v komoře. Vzhledem k tomu, že můžete počítat počet buněk v oblasti sítí a objem je znám, lze koncentraci buněk ve vzorku snadno určit. Níže je ilustrace hemocytometru.,
Jak používat hemocytometer počítat buňky
- Příprava vzorku
Míchání vzorku před přijetím vzorků. Vyhněte se shlukům.
- odpovídající ředění
koncentrace buněk by neměla být příliš vysoká nebo příliš nízká. Pokud je koncentrace buněk příliš vysoká, je těžké počítat buňky vizuálně pod mikroskopem. Pokud je koncentrace buněk příliš nízká, musíte počítat více čtverců a možná i vícekrát, abyste se vyhnuli statistickým chybám., Pokud je koncentrace buněk příliš vysoká, zkuste to udělat 1:10, 1:100, 1:1000 sériová ředění (viz obrázek níže).
- zavedení buněčné suspenze
umístěte kryt přes počítací plochu. Vložte buněčnou suspenzi (10 µL nebo jednu kapku) z okraje krytu pomocí jemné pipety pro přenos hrotu. Kapilární síla přetáhne kapalinu, aby vyplnila oblast pod krytím. Dostatek kapaliny by měl být zaveden tak, aby počítací plocha byla právě pokryta.,
- počítání buněk
pomocí mikroskopu se zaměřte na mřížky počítací oblasti s cílem 5-10x. Počítejte buňky v jedné sadě 16 čtverců (1×1 mm čtvercová plocha; modrá oblast). Měli byste nastavit pravidlo počítání.
například, spočítat buňky na levé a horní čáry čtverce (označen zelenou linku), ale nepočítají se buňky na dolním a práva řádky náměstí (označené červenou linkou). Přesuňte hemocytometr na další sadu 16 rohových čtverců a pokračujte v počítání, dokud se nezapočítají všechny 4 sady 16 čtverců., Vezměte obrázek níže jako příklad, čísla buněk 4 sady 16 čtverců jsou 3, 5, 6, 4, resp. Tedy průměrný počet buněk tohoto počítání je (3+5+6+4)/4 = 4.5
- Výpočet koncentrace buněk
spočítejte počet buněk na mL: Vezměte průměrného počtu buněk z každé sady 16 rohu čtverce. Vynásobte 10 000. Konečná hodnota je počet buněk / mL v původní buněčné suspenzi, pokud není ředění. V tomto případě je průměrné číslo buňky, které jste vypočítali výše, 4,5 a poté vynásobte 10 000., Proto 4, 5*10 000 = 45 000. Koncentrace je 45 000 buněk / ml. Pokud se jedná o 10násobné ředění,budete se muset vynásobit 10; přivést ji zpět na 450 000 buněk / ml.
můžete také vidět demo video zde.
Jak používat hemocytometer k určení životaschopnosti buněk
Trypanovou modř je barvivo používané rozlišit živé a mrtvé buňky. Je to životně důležitá skvrna, která není absorbována zdravými životaschopnými buňkami, ale skvrny buněk poškozenou buněčnou membránou. Proto mohou být pouze mrtvé buňky zbarveny jako modré a lze je vidět pod mikroskopem., Tato metoda se označuje jako metoda vyloučení barviva.
K určení životaschopnosti buněk, můžeme použít stejnou metodu jako mobilní počítání. Jediným rozdílem je, že je třeba smíchat buněčnou suspenzi s barvivem Trypan blue před zavedením buněčné suspenze do hemocytometru. Začneme!
1. Vytváření vhodných ředění
stejně jako to, co jsme diskutovali výše, vhodné ředění usnadní váš život počítání. Příliš mnoho nebo příliš málo buněk není dobré pro počítání.
2., Míchání stejné množství buněčné suspenze a Trypanovou modré barvivo
koncentrace Trypanovou modř je 0,4% (w/w). Pracovní koncentrace je 0,2%; to je důvod, proč smícháme stejný objem buněčné suspenze se stejným objemem 0,4% Trypanovou modří. Nezapomeňte, že koncentrace buněk je nyní zředěna 2krát!
3. Zavedení suspenze buněk
umístěte kryt přes počítací plochu. Vložte buněčnou suspenzi (10 µL nebo jednu kapku) z okraje krytu pomocí jemné pipety pro přenos hrotu. Počkejte 1 minutu, aby se buňky usadily.
4., Počítání životaschopnosti buněk
pomocí mikroskopu se zaměřte na čáry mřížky počítací oblasti s cílem 5-10x. Nyní můžete vidět, že některé buňky jsou průhledné, lesklé, s kulatým a hladkým tvarem. Jedná se o zdravé a živé buňky. Můžete také vidět, že některé buňky jsou uvnitř modré, s opravdu hrubým obrysem ve svém tvaru. Jedná se o nezdravé a mrtvé buňky. Poté, co jste si jisti, že je rozlišujete, můžete začít počítat počet živých buněk a mrtvých buněk.
Vezměme si příklad obrázku níže.
počet živých buněk (bílých krvinek) je (2, 5, 5, 3) ve 4 světle modrých čtvercích.,
průměrné počty živých buněk jsou (2+5+5+3)/4 = 3.75.
počet mrtvých buněk (modré buňky) je (1, 0, 1, 1) ve 4 světle modrých čtvercích.
průměr se počítá z mrtvých buněk, je (1+0+1+1)/4 = 0.75
Proto životaschopnost buněk se vypočítá jako:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, což je 83%.
Hemocytometer aplikace
Odhadnout velikost buňky
Protože mřížka má specifický rozměr, některé linky jsou 0,25 mm mezi; některé linky jsou 0.,05 mm mezi nimi (viz obrázek níže). Proto můžete snadno odhadnout velikost buněk. Pokud chcete přesněji určit velikost buňky, můžete pořídit snímek obrazu pod mikroskopem. Poté použijte software, jako je obrázek J, kde můžete softwaru říci „pevná délka se rovná 1 mm“. Převede a vypočítá velikost buňky pro vás.
Provedení krvinek
hemocytometer původně byl navržen pro krevní obraz., Naše krev se skládá z červených krvinek, bílých krvinek a krevních destiček. Číslo buňky a složení každého typu buňky mohou lékaři sdělit zdravotní stav vašeho těla. Například nízký počet červených krvinek způsobuje pocity únavy a slabosti (anémie). Zvýšení počtu bílých krvinek může naznačovat infekci, alergii, zánět nebo jiné nemoci. Proto je hemocytometr velmi důležitým nástrojem v lékařské testovací laboratoři kvůli své schopnosti počítat počet buněk a složení každého typu buněk.,
proveďte počet buněk pro buněčnou kulturu
když pěstuji buňky v laboratoři, musím změnit buněčné médium každý den (záleží na tom, jak rychle buňky rostou). Poté, co přilnavé buňky rostou, aby obsadily 95% povrchu misky, je čas „projít“ buňky do jiné misky. To, co děláme, je oddělit buňky, vytvořit homogenní suspenzi a spočítat počet buněk. Počet buněk je velmi důležitý pro buněčnou kulturu. Buňky nemusí růst velmi dobře nebo zemřít, pokud máte v misce příliš málo buněk. Schopnost počítat číslo buňky je tedy základní dovedností pro buněčnou kulturu.,
kde koupit hemocytometer
Amazon je dobrým místem pro začátek. V Amazonu najdete různé hemocytometry s různými cenovými rozsahy a vlastnostmi. Rs‘ Věda nabízí také „vše v jednom kit“, který přichází s hemocytometer, krycí sklíčko, Trypanovou Modř a Methylenová Modř zhodnotit životaschopnost buněk a vialek, fajn tip převod pipety, objektiv papírové brožury. Vše, co potřebujete, abyste mohli začít, je v jedné sadě.
Leave a Reply