jakaminen on välittämistä!
(päivitys 6/07/2020)
Tämä artikkeli kattaa
Mitä on hemocytometer
hemocytometer on counting jaosto laite on alun perin suunniteltu laskenta verisolujen (nimi ”hemo” tarkoittaa verta). Hemocytometer on kuin paksu näyte dia, johon on kaiverrettu ruudukko., Kun coverslip asetetaan hemosytometriin, coverslip piti näytettä tietyllä korkeudella (tyypillisesti 0,1 mm).
ruudukolla on myös erityiset mitat, joten kammion tilavuus voidaan laskea. Koska voit laskea alueen solujen verkkojen ja tilavuus tiedetään, pitoisuus solujen näytteessä voidaan määrittää helposti. Alla on kuva hemosytometristä.,
Kuinka käyttää hemocytometer laskea soluja,
- näytteen Valmistelu
Sekoittamalla näyte hyvin ennen kuin otat näytteitä. Vältä paakkuja.
- Tekemällä sopivia laimennoksia
pitoisuus soluissa ei saa olla liian korkea tai liian matala. Jos solupitoisuus on liian korkea, soluja on vaikea laskea silmämääräisesti mikroskoopilla. Jos solun pitoisuus on liian alhainen, sinun täytyy luottaa enemmän neliöitä ja ehkä useammin välttää tilastollisia virheitä., Jos solun pitoisuus on liian korkea, kokeile tehdä 1:10, 1:100, 1:1000 sarja laimennoksia (katso kuva alla).
- Esittelyssä solususpensiota
Aseta peitinlasin yli laskenta pinta. Käyttöön solususpensiota (10 µL tai yksi tippa) reunasta peitinlasin hieno vihje siirrä pipetti. Kapillaarivoima vetää nestettä täyttämään alueen poukaman alla. Nestettä pitäisi ottaa riittävästi käyttöön, jotta laskupinta vain peittyy.,
- Laskee solut
Käyttämällä mikroskoopilla, keskittyä ruudukko laskenta-alue, jossa on 5-10x tavoite. Lasketaan solut yhteen 16 neliön kokonaisuuteen (1×1 mm: n neliöpinta-ala; sininen alue). Sinun pitäisi asettaa laskusääntö.
esimerkiksi laskea solujen päälle ja lähti linjat neliön (merkitty vihreä viiva), mutta ei lasketa solut pohjaan ja oikeudet linjat neliön (merkitty punainen viiva). Siirrä hemocytometer seuraavaan joukko 16 kulman neliöt ja edelleen laskea, kunnes kaikki 4 sarjaa 16 neliöt lasketaan., Ota kuva alla esimerkiksi solujen määrä 4 sarjaa 16 neliöt ovat 3, 5, 6, 4, vastaavasti. Siksi keskimääräinen solujen määrä tämän laskenta on (3+5+6+4)/4 = 4.5
- laskea solujen pitoisuus
laskea solujen määrä / mL: Ota keskimääräinen solumäärä kustakin sarjaa 16 kulman neliöt. Kerro 10 000: lla. Lopullinen arvo on solujen määrä/mL alkuperäisessä solususpensiossa, jos laimennusta ei ole. Tällöin edellä laskettu keskimääräinen soluluku on 4,5 ja kerrotaan sitten 10 000: lla., Siksi 4, 5*10 000 = 45 000. Pitoisuus on 45 000 solua/mL. Jos tämä on 10 kertainen laimennus, sinun täytyy kertoa 10; tuo se takaisin 450 000 solua/mL.
voit katsoa demovideon myös täältä.
Kuinka käyttää hemocytometer määrittää solujen elävyys
Trypan blue on väriaine käytetään erottamaan elävät ja kuolleet solut. Se on tärkeä tahra, joka ei imeydy terveisiin elinkelpoisiin soluihin, vaan värjää soluja vaurioituneella solukalvolla. Siksi vain kuolleet solut voidaan värjätä sinisiksi ja ne voidaan nähdä mikroskoopilla., Tätä menetelmää kutsutaan väriaineiden poissulkemismenetelmäksi.
Voit määrittää solun elinkelpoisuutta, käytämme samaa menetelmää kuin solu laskenta. Ainoa ero on, että sinun täytyy sekoittaa solususpensiota kanssa Trypan blue dye ennen käyttöönottoa solujen suspension hemocytometer. Aloitetaan!
1. Sopivien laimennosten tekeminen
kuten edellä puhuimme, asianmukaiset laimennukset helpottavat laskemista. Liikaa tai liian vähän soluja ei ole hyvä laskea.
2., Sekoittamalla yhtä paljon solususpensiota ja Trypansinistä väriainetta
trypansinisen pitoisuus on 0,4% (w/w). Käyttöpitoisuus on 0,2%; se on syy, miksi sekoitamme yhtä paljon solususpensiota 0,4% trypaanisinisellä tilavuudella. Muista, että solukonsentraatiosi on nyt laimennettu 2-kertaiseksi!
3. Solususpensio
aseta coverslip laskupinnan päälle. Käyttöön solususpensiota (10 µL tai yksi tippa) reunasta peitinlasin hieno vihje siirrä pipetti. Odota 1 min, jolloin solut asettuvat.
4., Laskenta solujen elävyys
Käyttämällä mikroskoopilla, keskittyä ruudukko laskenta-alue, jossa on 5-10x tavoite. Nyt voit nähdä joitakin soluja ovat läpinäkyviä, kiiltävä, pyöreä ja sileä muoto. Nämä ovat terveitä ja eläviä soluja. Voit myös nähdä joitakin soluja ovat sinisiä sisällä, todella karkea ääriviivat niiden muoto. Nämä ovat epäterveellisiä ja kuolleita soluja. Kun olet varma erottaa ne, voit alkaa laskea elävien solujen ja kuolleiden solujen määrä.
otetaan esimerkki alla olevasta kuvasta.
laskee elävien solujen (valkosolut), ovat (2, 5, 5, 3) 4 vaaleansininen neliöt.,
elävien solujen keskimääräiset määrät ovat (2+5+5+3)/4 = 3.75.
laskee kuolleita soluja (siniset solut) ovat (1, 0, 1, 1) 4 vaaleansininen neliöt.
kuolleiden solujen keskimääräiset määrät ovat (1+0+1+1)/4 = 0.75
näin ollen solun elinkelpoisuus lasketaan seuraavasti:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, eli 83 prosenttia.
Hemocytometer sovelluksia
Arvio solun koko
Koska verkko on erityinen ulottuvuus, jotkut linjat ovat 0,25 mm: n välillä; jotkut linjat ovat 0.,05 mm välissä (KS.alla oleva kuva). Siksi voit helposti arvioida solujen koon. Jos haluat määrittää solun koon tarkemmin, voit ottaa kuvan kuvan alla. Sitten, Käytä softwares kuten image J, jossa voit kertoa ohjelmiston ”kiinteä pituus on yhtä suuri kuin 1 mm”. Se muuntaa ja laskea solun koon sinulle.
Suorita verenkuva
hemocytometer alun perin oli suunniteltu verenkuva., Veremme koostuu punasoluista, valkosoluista ja verihiutaleista. Solunumero ja kunkin solutyypin koostumus voivat kertoa lääkärille terveydentilastasi. Esimerkiksi alhainen punasolujen määrä aiheuttaa väsymystä ja heikkoutta (anemia). Valkosolujen määrän lisääntyminen voi viitata infektioon, allergiaan, tulehdukseen tai muihin sairauksiin. Siksi hemosytometri on erittäin tärkeä työkalu lääketieteellisessä testilaboratoriossa, koska se pystyy laskemaan solujen määrän ja kunkin solutyypin koostumuksen.,
Suorita-solumäärä solujen kulttuuri
Kun kasvattaa soluja laboratoriossa, minun täytyy muuttaa solun väliaine joka toinen päivä (riippuu siitä, kuinka nopeasti solut kasvavat). Kun kiinnittyneet solut kasvavat miehittämään 95% lautasen pinnasta, on aika ”siirtää” soluja toiseen astiaan. Se mitä teemme on irrottaa soluja, tehdä homogeeninen suspensio, ja laskea solujen määrä. Solujen määrä on soluviljelyn kannalta erittäin tärkeä. Solut eivät välttämättä kasva kovin hyvin tai kuole, jos lautasella on liian vähän soluja. Näin ollen kyky laskea soluluku on soluviljelyn perustaito.,
Mistä ostaa hemocytometer
Amazon on hyvä paikka aloittaa. Amazonista löytyy erilaisia hemosytometrejä, joilla on erilaiset hintaluokat ja ominaisuudet. Rs’ Tiede tarjoaa myös ”all in one kit”, joka tulee hemocytometer, peitinlasin, Trypan Blue ja metyleenisinistä arvioimaan solujen elävyys ja näyte injektiopulloa, hieno kärki siirtää pipetit, linssi paperi kirjanen. Kaikki, mitä sinun tarvitsee aloittaa, on yhdessä paketissa.
Leave a Reply