delning är omtänksam!
(uppdatering 6/07/2020)
den här artikeln täcker
Vad är en hemocytometer
hemocytometern är en en räkningskammaranordning som ursprungligen utformats för att räkna blodkroppar (namnet ”hemo” betyder blod). Hemocytometer är som en tjock preparatglas med ett rutnät ingraverat på den., När täckglaset placeras på hemocytometern höll täckglaset provet i en viss höjd (typiskt 0,1 mm).
gallret har också specifika dimensioner, därför kan volymen i kammaren beräknas. Eftersom du kan räkna antalet celler i gallret och volymen är känd kan koncentrationen av celler i provet bestämmas enkelt. Nedan är en illustration av en hemocytometer.,
hur man använder en hemocytometer för att räkna celler
- förbereda provet
blanda provet väl innan proverna tas. Undvik klumpar.
- göra lämpliga utspädningar
koncentrationen av celler bör inte vara för hög eller för låg. Om cellkoncentrationen är för hög är det svårt att räkna celler visuellt under mikroskopet. Om cellkoncentrationen är för låg måste du räkna fler rutor och kanske fler gånger för att undvika de statistiska felen., Om cellkoncentrationen är för hög, försök att göra 1:10, 1:100, 1:1000 seriella utspädningar (se bilden nedan).
- introduktion av cellsuspension
Placera täckglaset över räkningsytan. För in cellsuspensionen (10 µL eller en droppe) från kanten av täckglaset med en fin spetsöverföringspipett. Kapillärkraften drar vätskan för att fylla området under täckglaset. Tillräckligt med vätska bör införas så att räkningsytan bara är täckt.,
- räkna cellerna
med hjälp av ett mikroskop, fokusera på rutnätslinjerna i räkningsområdet med ett 5-10x-mål. Räkna cellerna i en uppsättning 16 rutor (1×1 mm fyrkantigt område; det blå området). Du bör ställa in en räkningsregel.
räkna till exempel cellerna på de övre och vänstra linjerna i en kvadrat (markerad med den gröna linjen), men räkna inte cellerna på botten-och rättighetslinjerna i en kvadrat (markerad med den röda linjen). Flytta hemocytometern till nästa uppsättning 16 hörnrutor och fortsätt att räkna tills alla 4 uppsättningar 16 rutor räknas., Ta bilden nedan som ett exempel, cellnumren på 4 uppsättningar 16 rutor är 3, 5, 6, 4 respektive. Därför är det genomsnittliga cellnumret för denna räkning (3+5+6+4)/4 = 4.5
- beräkna cellkoncentrationen
för att beräkna antalet celler per mL: ta det genomsnittliga celltalet från var och en av uppsättningarna med 16 hörnrutor. Multiplicera med 10 000. Slutvärdet är antalet celler / mL i den ursprungliga cellsuspensionen om det inte finns någon utspädning. I det här fallet är det genomsnittliga cellnumret du beräknade ovan 4,5, multiplicera sedan med 10 000., Därför 4, 5*10 000 = 45 000. Koncentrationen är 45 000 celler / mL. Om detta är en 10-faldig utspädning måste du multiplicera med 10; ta tillbaka den till 450 000 celler / mL.
Du kan också se en demo video här.
hur man använder en hemocytometer för att bestämma cellens viabilitet
Trypan blue är ett färgämne som används för att skilja mellan levande och döda celler. Det är en vital fläck som inte absorberas av friska livskraftiga celler, men fläckar celler med ett skadat cellmembran. Därför kan endast döda celler färgas som blå och ses under mikroskopet., Denna metod kallas färgen uteslutningsmetod.
för att bestämma cellens viabilitet använder vi samma metod som cellräkningen. Den enda skillnaden är att du måste blanda cellsuspensionen med Trypanblått färgämne innan du introducerar cellsuspension till hemocytometern. Låt oss börja!
1. Göra lämpliga utspädningar
liksom vad vi diskuterade ovan, lämpliga utspädningar kommer att göra din räkna livet lättare. För mycket eller för lite av celler är inte bra för att räkna.
2., Blandning av samma volym cellsuspension och Tripanblått färgämne
koncentrationen av Trypanblått är 0, 4% (w/w). Arbetskoncentrationen är 0,2%; det är anledningen till att vi blandar lika stor volym cellsuspension med en lika stor volym på 0,4% Trypanblå. Kom ihåg att din cellkoncentration nu späds 2 gånger!
3. Införa cell suspension
placera täckglaset över räkneytan. För in cellsuspensionen (10 µL eller en droppe) från kanten av täckglaset med en fin spetsöverföringspipett. Vänta på 1 min så att cellerna kan lösa sig.
4., Räkna cellviabiliteten
med hjälp av ett mikroskop, fokusera på rutnätslinjerna i räkningsområdet med ett 5-10x-mål. Nu kan du se att vissa celler är transparenta, glänsande, med rund och slät form. Dessa är friska och levande celler. Du kan också se vissa celler är blå inuti, med en riktigt grov kontur i sin form. Dessa är ohälsosamma och döda celler. När du är säker på att skilja dem kan du börja räkna antalet levande celler och döda celler.
låt oss ta ett exempel på bilden nedan.
antalet levande celler (vita celler) är (2, 5, 5, 3) i 4 Ljusblå rutor.,
det genomsnittliga antalet levande celler är (2+5+5+3)/4 = 3.75.
antalet döda celler (blå celler) är (1, 0, 1, 1) i 4 Ljusblå rutor.
det genomsnittliga antalet döda celler är (1+0+1+1)/4 = 0.75
därför beräknas cellviabiliteten som:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, vilket är 83%.
Hemocytometer applikationer
uppskatta cellstorleken
eftersom gallret har en specifik dimension är vissa linjer 0,25 mm däremellan; vissa linjer är 0.,05 mm däremellan (se bilden nedan). Därför kan du enkelt uppskatta storleken på cellerna. Om du vill bestämma cellstorleken mer exakt kan du ta en bild av bilden under mikroskopet. Använd sedan mjukvaror som bild J, där du kan berätta för programvaran ”en fast längd är lika med 1 mm”. Det kommer att konvertera och beräkna cellstorleken för dig.
utför ett blodcellantal
hemocytometern var ursprungligen avsedd för blodtalet., Vårt blod består av röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar. Cellnumret och sammansättningen av varje celltyp kan berätta för en läkare din kropp hälsotillstånd. Till exempel orsakar lågt antal röda blodkroppar känslor av trötthet och svaghet (anemi). En ökning av antalet vita blodkroppar kan indikera infektion, allergi, inflammation eller andra sjukdomar. Därför är en hemocytometer ett mycket viktigt verktyg i det medicinska testlabbet på grund av dess förmåga att räkna antalet celler och sammansättningen av varje celltyp.,
utför cellantal för cellkultur
När jag odlar celler i labbet måste jag byta cellmedium varje par dagar (beror på hur snabbt cellerna växer). Efter vidhäftande celler växer för att uppta 95% av ytan på en maträtt, är det dags att ”passera” celler till en annan maträtt. Vad vi gör är att lossa celler, göra en homogen suspension och räkna antalet celler. Antalet celler är mycket viktigt för cellkultur. Celler kan inte växa mycket bra eller dö om du har för få celler i en maträtt. Därför är förmågan att räkna cellnumret en grundläggande färdighet för cellkultur.,
var kan man köpa en hemocytometer
Amazon är ett bra ställe att börja. Du kan hitta en mängd olika hemocytometrar med olika prisklasser och egenskaper hos Amazon. Rs ’Science erbjuder också en” allt i ett kit ” som levereras med en hemocytometer, coverslip, Trypanblå och metylenblå för att utvärdera cellens viabilitet och provflaskor, fina spetsöverföringspipetter, linspappershäfte. Allt du behöver för att komma igång är i ett kit.
Leave a Reply