delen is zorgzaam!
(update 6/07/2020)
Dit artikel behandelt
Wat is een hemocytometer
de hemocytometer is een telkamer die oorspronkelijk is ontworpen voor het tellen van bloedcellen (de naam “Hemo” betekent bloed). Hemocytometer is als een dia met een raster erop gegraveerd., Wanneer de coverslip wordt geplaatst op de hemocytometer, de coverslip hield het monster in een specifieke hoogte (meestal 0,1 mm).
het raster heeft ook specifieke afmetingen, daarom kan het volume in de kamer worden berekend. Aangezien u het aantal cellen in het gebied van rasters kunt tellen en het volume bekend is, kan de concentratie van cellen in het monster gemakkelijk worden bepaald. Hieronder is een illustratie van een hemocytometer.,
hoe gebruik je een hemocytometer om cellen te tellen
- het monster voorbereiden
het monster goed mengen voordat de monsters worden genomen. Vermijd klontjes.
- geschikte verdunningen maken
de concentratie van cellen mag niet te hoog of te laag zijn. Als de celconcentratie te hoog is, is het moeilijk om cellen visueel onder de microscoop te tellen. Als de celconcentratie te laag is, moet u meer vierkanten en misschien meer keren tellen om de statistische fouten te voorkomen., Als de celconcentratie te hoog is, probeer dan 1:10, 1:100, 1:1000 seriële verdunningen (zie de afbeelding hieronder).
- Introducerende celsuspensie
plaats de coverslip over het teloppervlak. Breng de celsuspensie (10 µL of een druppel) vanaf de rand van de coverslip met een fijne tip transfer pipet. De capillaire kracht zal de vloeistof slepen om het gebied onder de dekslip te vullen. Er moet voldoende vloeistof worden ingebracht zodat het teloppervlak net bedekt is.,
- het tellen van de cellen
met behulp van een microscoop, focus op de rasterlijnen van het telgebied met een 5-10x objectief. Tel de cellen in één set van 16 vierkanten (1 × 1 mm vierkant gebied; het blauwe gebied). Je moet een telregel instellen.
Tel bijvoorbeeld de cellen op de bovenste en linkerlijn van een vierkant (gemarkeerd door de groene lijn), maar tel niet de cellen op de onderste en rechterlijn van een vierkant (gemarkeerd door de rode lijn). Verplaats de hemocytometer naar de volgende set van 16 hoekvierkantjes en blijf tellen totdat alle 4 sets van 16 vierkantjes zijn geteld., Neem de foto hieronder als voorbeeld, de celnummers van 4 sets van 16 vierkanten zijn respectievelijk 3, 5, 6, 4. Daarom is het gemiddelde celaantal van deze telling(3+5+6+4)/4 = 4.5
- berekening van de celconcentratie
om het aantal cellen per mL te berekenen: neem het gemiddelde aantal cellen uit elk van de sets van 16 hoekvierkantjes. Vermenigvuldig met 10.000. De uiteindelijke waarde is het aantal cellen/mL in de oorspronkelijke celsuspensie als er geen verdunning is. In dit geval is het gemiddelde celnummer dat u hierboven hebt berekend 4,5 en vermenigvuldig dan met 10.000., Dus 4,5 * 10.000 = 45.000. De concentratie is 45.000 cellen / mL. Als dit een 10-voudige verdunning is, moet u met 10 vermenigvuldigen; breng het terug naar 450.000 cellen/mL.
U kunt hier ook een demovideo zien.
hoe een hemocytometer te gebruiken om de levensvatbaarheid van de cellen te bepalen
Trypan blue is een kleurstof die wordt gebruikt om levende en dode cellen te onderscheiden. Het is een vitale vlek die niet wordt geabsorbeerd door gezonde levensvatbare cellen, maar vlekken cellen met een beschadigd celmembraan. Daarom kunnen alleen dode cellen worden gekleurd als blauw en kunnen worden gezien onder de microscoop., Deze methode wordt aangeduid als de kleurstofuitsluitingsmethode.
om de levensvatbaarheid van cellen te bepalen, gebruiken we dezelfde methode als het tellen van cellen. Het enige verschil is dat je de celsuspensie moet mengen met Trypan blue kleurstof voordat je de celsuspensie aan de hemocytometer introduceert. Laten we beginnen!
1. Het maken van geschikte verdunningen
zoals we hierboven hebben besproken, zullen geschikte verdunningen uw telleven gemakkelijker maken. Te veel of te weinig cellen is niet goed om te tellen.
2., Menging gelijk volume celsuspensie en Trypan blue kleurstof
De concentratie Trypan blue is 0,4% (m / m). De werkconcentratie is 0,2%; daarom mengen we een gelijk volume celsuspensie met een gelijk volume van 0,4% Trypan blue. Onthoud dat je celconcentratie nu 2-voudig verdund is!
3. Introductie van celsuspensie
plaats de coverslip over het teloppervlak. Breng de celsuspensie (10 µL of een druppel) vanaf de rand van de coverslip met een fijne tip transfer pipet. Wacht 1 min, zodat de cellen zich kunnen vestigen.
4., Het tellen van de levensvatbaarheid van de cellen
met behulp van een microscoop, focus op de rasterlijnen van het telgebied met een 5-10x objectief. Nu kun je zien dat sommige cellen transparant, glanzend, met ronde en gladde vorm zijn. Dit zijn gezonde en levende cellen. Je kunt ook zien dat sommige cellen van binnen blauw zijn, met een echt ruwe omtrek in hun vorm. Dit zijn ongezonde en dode cellen. Nadat u er zeker van bent om ze te onderscheiden, kunt u beginnen met het tellen van het aantal levende cellen en dode cellen.
laten we een voorbeeld nemen van de afbeelding hieronder.
De aantallen levende cellen (witte cellen) zijn (2, 5, 5, 3) in 4 lichtblauwe vierkanten.,
De gemiddelde tellingen van levende cellen zijn (2+5+5+3)/4 = 3.75.
de tellingen van dode cellen (blauwe cellen) zijn (1, 0, 1, 1) in 4 lichtblauwe vierkanten.
Het gemiddelde aantal dode cellen is (1+0+1+1)/4 = 0.75
daarom wordt de levensvatbaarheid van de cellen berekend als:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, dat is 83%.
Hemocytometertoepassingen
schat de celgrootte
omdat het raster een specifieke dimensie heeft, liggen sommige lijnen 0,25 mm ertussen; sommige lijnen zijn 0.,05 mm ertussen (zie de afbeelding hieronder). Daarom kunt u eenvoudig de grootte van de cellen schatten. Als u de celgrootte nauwkeuriger wilt bepalen, kunt u een foto van het beeld onder de microscoop maken. Gebruik dan software zoals image J, waar u de software kunt vertellen “een vaste lengte is gelijk aan 1 mm”. Het zal de celgrootte voor u converteren en berekenen.
voer een bloedceltelling uit
De hemocytometer was aanvankelijk ontworpen voor het bloedbeeld., Ons bloed bestaat uit rode bloedcellen, witte bloedcellen en bloedplaatjes. Het celnummer en de samenstelling van elk celtype kunnen een arts uw gezondheidstoestand vertellen. Bijvoorbeeld, laag in rode bloedcellen veroorzaakt gevoelens van vermoeidheid en zwakte (bloedarmoede). Een toename van het aantal witte bloedcellen kan wijzen op infectie, allergie, ontsteking of andere ziekten. Daarom is een hemocytometer een zeer belangrijk hulpmiddel in het medische testlaboratorium vanwege zijn vermogen om het aantal cellen en de samenstelling van elk celtype te tellen.,
voer het aantal cellen uit voor celkweek
wanneer ik cellen kweek in het lab, moet ik het celmedium om de paar dagen veranderen (afhankelijk van hoe snel de cellen groeien). Nadat aanhangende cellen groeien om 95% van het oppervlak van een schotel te bezetten, is het tijd om cellen naar een andere schotel te “passage”. We maken cellen los, maken een homogene suspensie en tellen het aantal cellen. Het aantal cellen is zeer belangrijk voor celcultuur. Cellen kunnen niet goed groeien of sterven als u te weinig cellen in een schotel. Vandaar, is de capaciteit om het celaantal te tellen een fundamentele vaardigheid voor celcultuur.,
waar een hemocytometer
Amazon kopen is een goede plek om te beginnen. U vindt een verscheidenheid aan hemocytometers met verschillende prijsklassen en kwaliteiten bij Amazon. Rs ‘Science biedt ook een ” alles in een kit” die wordt geleverd met een hemocytometer, coverslip, Trypan blauw en methyleen blauw om de levensvatbaarheid van de cel te evalueren en monster flesjes, fijne tip transfer pipetten, lens papieren boekje. Alles wat je nodig hebt om te beginnen is in één kit.
Leave a Reply