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(update6/07/2020)
この記事では、
血球計とは何ですか
血球計は計数室ですもともと血液細胞を数えるために設計されたデバイス（名前”hemo”は血液を意味します）。 Hemocytometerはそれで刻まれる格子が付いている厚い標本のスライドのようである。, Coverslipがhemocytometerに置かれるとき、coverslipは特定の高さ（普通0.1mm）のサンプルを握った。
グリッドはまた、特定の寸法を有するので、チャンバ内の体積を計算することができる。 グリッドの領域にある細胞の数を数えることができ、体積がわかっているので、試料中の細胞の濃度を簡単に決定することができます。 以下は血球計のイラストです。,
細胞を数えるために血球計を使用する方法
- サンプルを準備する
サンプルを採取する前にサンプルをよく混 群生を避けなさい。
- 適切な希釈を行う
細胞の濃度は、高すぎたり低すぎたりしてはならない。 細胞濃度が高すぎると、顕微鏡下で細胞を視覚的に数えることは困難である。 細胞濃度が低すぎる場合は、統計誤差を避けるために、より多くの正方形を数え、おそらくより多くの時間を数える必要があります。, 細胞濃度が高すぎる場合は、次のようにしてください1:10, 1:100, 1:1000 連続希釈（下の図を参照）。
- セル懸濁液を導入する
カバースリップを計数面の上に置きます。 細かいチップトランスファーピペットでカバースリップの端から細胞懸濁液（10μlまたは一滴）を導入します。 毛管力はcoverslipの下で区域を満たすために液体を引張ります。 計数面がちょうど覆われるように十分な液体を導入する必要があります。,
- 細胞を数える
顕微鏡を用いて、5-10倍の対物レンズで計数領域のグリッド線に焦点を当てます。 16個の正方形のセット（1×1mmの正方形の領域、青い領域）でセルを数えます。 数えるルールを設定する必要があります。
たとえば、正方形の上と左の線（緑の線でマークされている）のセルを数えますが、正方形の下と右の線（赤い線でマークされている）のセルを数えません。 血球計を次の16個の角の正方形のセットに移動し、4個の16個の正方形のすべてがカウントされるまでカウントを続けます。, 下の写真を例にとると、4セットの16個の正方形のセル番号は、それぞれ3、5、6、4です。 したがって、この計数の平均セル数は(3+5+6+4)/4 = 4.5
- 細胞濃度の計算
mLあたりの細胞数を計算するには、16個の角の正方形のそれぞれのセットから平均細胞数を取ります。 10,000を掛けます。 最終値は、希釈がない場合の元の細胞懸濁液中の細胞数／mLである。 この場合、上記で計算した平均セル数は4.5で、10,000を掛けます。, したがって、4.5*10,000=45,000です。 濃度は45,000細胞/mLである。 これが10倍の希釈である場合は、10を掛ける必要があります。450,000細胞/mLに戻します。
デモビデオもこちらでご覧いただけます。
細胞生存率を決定するために血球計を使用する方法
トリパンブルーは、生細胞と死細胞を区別するために使用される色素です。 それは健康な生存細胞によって吸収されないが、損傷した細胞膜を有する細胞を染色する重要な染色である。 したがって、死んだ細胞のみが青色として染色され、顕微鏡下で見ることができる。, この方法を染料排除法と称する。
細胞生存率を決定するために、細胞カウントと同じ方法を使用します。 唯一の違いは、細胞懸濁液を血球計に導入する前に、細胞懸濁液をトリパンブルー色素と混合する必要があることです。 始めよう！
1. 適切な希釈を行う
我々は上記のように、適切な希釈は、あなたのカウントの生活が容易になります。 すぎもとの細胞になる。
2., 細胞懸濁液とトリパンブルー色素の等量の混合
トリパンブルーの濃度は0.4％（w/w）である。 働く集中は0.2%です;それは私達が0.4%のトリパンの青の等しい容積と細胞の懸濁液の等しい容積をなぜ混合するか理由です。 あなたの細胞の集中が今2倍に薄くなることを覚えなさい!
3. 細胞懸濁液を導入する
カバースリップをカウント面の上に置きます。 細かいチップトランスファーピペットでカバースリップの端から細胞懸濁液（10μlまたは一滴）を導入します。 細胞が落ち着くのを1分待つ。
4., 顕微鏡を用いて細胞生存率をカウントし、5-10倍の対物レンズで計数領域のグリッド線に焦点を当てます。 現在では一部の細胞の透明性、光沢があり、丸く滑らかな形状です。 これらは健康で生きた細胞です。 また、いくつかのセルが内側に青く、その形が本当に大まかな輪郭であることがわかります。 これらは不健康で死んだ細胞です。 あなたがそれらを区別することに自信を持ったら、生細胞と死細胞の数を数え始めることができます。
下の写真の例を見てみましょう。
生きた細胞（白い細胞）の数は（2、5、5、3）の4つの水色の正方形である。,
生きている細胞の平均カウントは次のとおりです(2+5+5+3)/4 = 3.75.
死んだ細胞（青い細胞）の数は、（1、0、1、1）の4つの水色の正方形である。
死んだ細胞の平均カウントは(1+0+1+1)/4 = 0.75
したがって、細胞生存率は次のように計算されます。
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, これは83％です。
血球計アプリケーション
セルサイズの推定
グリッドには特定の寸法があるため、一部のラインは0.25mm、一部のラインは0です。,その間に05mm（下の画像を参照）。 したがって、セルのサイズを簡単に見積もることができます。 セルサイズをより正確に決定したい場合は、顕微鏡下で画像の写真を撮ることができます。 次に、image Jのようなソフトウェアを使用して、ソフトウェアに”固定長は1mmに等しい”と伝えることができます。 それはあなたのためにセルサイズを変換して計算します。
血液細胞数を実行する
血球計は、最初は血球数のために設計されました。, 私たちの血液は、赤血球、白血球、および血小板で構成されています。 各細胞タイプの細胞番号と組成は、医師にあなたの体の健康状態を伝えることができます。 例えば、赤血球数が少ないと、疲労感や衰弱（貧血）が生じます。 白血球の数の増加は、感染、アレルギー、炎症または他の疾患を示し得る。 したがって、血球計は、細胞の数および各細胞タイプの組成を数える能力のために、医学的検査ラボにおいて非常に重要なツールである。,
細胞培養の細胞数を実行する
研究室で細胞を増殖させるときは、数日ごとに細胞培地を変更する必要があります（細胞の成長速度に 付着細胞が皿の表面の95％を占めるように成長した後、それは別の皿に細胞を”通過”する時間である。 私たちが行うことは、細胞を切り離し、均質な懸濁液を作り、細胞の数を数えることです。 細胞の数は細胞培養にとって非常に重要です。 細胞は非常によく育たないか、または皿で余りに少数の細胞があれば死ぬかもしれません。 したがって、細胞数を数える能力は、細胞培養のための基本的なスキルである。,
血球計を購入する場所
Amazonは始めるのに適した場所です。 Amazonでは、さまざまな価格帯と品質を持つさまざまな血球計を見つけることができます。 Rsの科学はまた細胞の実行可能性およびサンプルガラスびん、良い先端の移動のピペット、レンズのペーパー小冊子を評価するためにhemocytometer、coverslip、Trypanの青およびメチレンブルーと付属している”オールインワンキット”を提供する。 あなたが始めるために必要なすべてのものは、一つのキットです。
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