Deling er omsorgsfuld!
(opdatering 6/07/2020)
Denne artikel omhandler
Hvad er en hemocytometer
hemocytometer er en optælling afdeling enhed, der oprindeligt er designet til at tælle blodlegemer (navnet “hæmo” betyder, at blodet). Hemocytometer er som et tykt objektglas med et gitter indgraveret på det., Når dækglasset er anbragt på hæmocytometeret, holdt dækglasset prøven i en bestemt højde (typisk 0,1 mm).
gitteret har også specifikke dimensioner, derfor kan volumenet i kammeret beregnes. Da du kan tælle antallet af celler i gitterområdet, og volumenet er kendt, kan koncentrationen af celler i prøven let bestemmes. Nedenfor er en illustration af et hæmocytometer.,
Hvordan man bruger en hemocytometer til at tælle celler
- Forberedelse af prøven
Blanding prøven godt, før du tager prøver. Undgå klumper.
- foretagelse af passende fortyndinger
koncentrationen af celler bør ikke være for høj eller for lav. Hvis cellekoncentrationen er for høj, er det svært at tælle celler visuelt under mikroskopet. Hvis cellekoncentrationen er for lav, skal du tælle flere firkanter og måske flere gange for at undgå de statistiske fejl., Hvis cellekoncentrationen er for høj, så prøv at gøre 1:10, 1:100, 1:1000 serielle fortyndinger (se illustrationen nedenfor).
- introduktion af cellesuspension
Placer dækglasset over tællefladen. Indfør cellesuspensionen (10 µL eller en dråbe) fra kanten af dækglasset med en fin spidsoverførselspipette. Kapillærkraften trækker væsken for at fylde området under dækglasset. Der skal introduceres nok væske, så tællefladen bare er dækket.,
- tælle cellerne
Ved hjælp af et mikroskop skal du fokusere på gitterlinjerne i tælleområdet med et 5-10 objective-mål. Tæl cellerne i et sæt af 16 firkanter (1 1 1 mm firkantet område; det blå område). Du skal indstille en tælleregel.
tæl for eksempel cellerne på de øverste og venstre linjer i en firkant (markeret med den grønne linje), men tæl ikke cellerne på bunden og rettighedslinjerne i en firkant (markeret med den røde linje). Flyt hæmocytometeret til det næste sæt med 16 hjørnefelter, og fortsæt med at tælle, indtil alle 4 sæt med 16 firkanter tælles., Tag billedet nedenfor som et eksempel, cellenumrene på 4 sæt med 16 firkanter er henholdsvis 3, 5, 6, 4. Derfor er det gennemsnitlige celletal for denne tælling (3+5+6+4)/4 = 4.5
- beregning af cellekoncentrationen
for at beregne antallet af celler pr. Multiplicer med 10.000. Den endelige værdi er antallet af celler / mL i den oprindelige cellesuspension, hvis der ikke er nogen fortynding. I dette tilfælde er det gennemsnitlige celletal, du har beregnet ovenfor, 4, 5, multiplicer derefter med 10.000., Derfor 4,5 * 10.000 = 45.000. Koncentrationen er 45.000 celler / mL. Hvis dette er en 10 gange fortynding, skal du multiplicere med 10; bring det tilbage til 450.000 celler / mL.
du kan også se en demo video her.
Sådan bruges et hæmocytometer til at bestemme cellelevedygtighed
Trypan blue er et farvestof, der bruges til at skelne mellem levende og døde celler. Det er en vital plet, der ikke absorberes af sunde levedygtige celler, men pletter celler med en beskadiget cellemembran. Derfor kan kun døde celler farves som blå og kan ses under mikroskopet., Denne metode kaldes farvestofudelukkelsesmetoden.
for At bestemme cellernes levedygtighed, at vi bruger samme metode, som celletælling. Den eneste forskel er, at du skal blande cellesuspension med Trypanblåt farvestof, før du introducerer cellesuspension til hæmocytometeret. Lad os starte!
1. Ved at foretage passende fortyndinger
som det, vi diskuterede ovenfor, vil passende fortyndinger gøre dit tælleliv lettere. For meget eller for lidt af celler er ikke godt til at tælle.
2., Blanding af samme volumen cellesuspension og koncentrationen af Trypan blue farvestof
koncentrationen af Trypan blue er 0, 4% (w/w). Arbejdskoncentrationen er 0,2%; det er grunden til, at vi blander lige volumen cellesuspension med et lige volumen på 0,4% Trypan blå. Husk, at din cellekoncentration nu er fortyndet 2 gange!
3. Introduktion af cellesuspension
Placer dækglasset over tællefladen. Indfør cellesuspensionen (10 µL eller en dråbe) fra kanten af dækglasset med en fin spidsoverførselspipette. Vent i 1 minut, så cellerne kan slå sig ned.
4., Ved at tælle cellelevedygtigheden
ved hjælp af et mikroskop skal du fokusere på gitterlinjerne i tælleområdet med et 5-10 objective-mål. Nu kan du se nogle celler er gennemsigtige, skinnende, med rund og glat form. Disse er sunde og levende celler. Du kan også se, at nogle celler er blå indeni, med en virkelig grov kontur i deres form. Disse er usunde og døde celler. Når du er sikker på at skelne dem, kan du begynde at tælle antallet af levende celler og døde celler.
Lad os tage et eksempel på billedet nedenfor.
tællingerne af levende celler (hvide celler) er (2, 5, 5, 3) i 4 Lyseblå firkanter.,
de gennemsnitlige tællinger af levende celler er (2+5+5+3)/4 = 3.75.
tællingerne af døde celler (blå celler) er (1, 0, 1, 1) i 4 Lyseblå firkanter.
det gennemsnitlige antal døde celler er (1+0+1+1)/4 = 0.75
derfor beregnes cellelevedygtigheden som:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, hvilket er 83%.
Hemocytometer programmer
Skøn cellens størrelse
Fordi nettet er en specifik dimension, og nogle linjer er 0,25 mm i mellem, og nogle linjer er 0.,05 mm imellem (se billedet nedenfor). Derfor kan du nemt estimere størrelsen af cellerne. Hvis du vil bestemme cellestørrelsen mere præcist, kan du tage et billede af billedet under mikroskopet. Brug derefter soft .are som billede J, hvor du kan fortælle soft .aren “en fast længde er lig med 1 mm”. Det vil konvertere og beregne cellestørrelsen for dig.
Udfør en blodlegemer count
hemocytometer oprindeligt blev designet for blod tæller., Vores blod består af røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader. Cellenummeret og sammensætningen af hver celletype kan fortælle en læge din krops helbredstilstand. For eksempel forårsager lavt antal røde blodlegemer følelser af træthed og svaghed (anæmi). En stigning i antallet af hvide blodlegemer kan indikere infektion, allergi, betændelse eller andre sygdomme. Derfor er et hæmocytometer et meget vigtigt redskab i det medicinske testlaboratorium på grund af dets evne til at tælle antallet af celler og sammensætningen af hver celletype.,
Udfør celletælling for cellekultur
Når jeg dyrker celler i laboratoriet, skal jeg ændre cellemediet hvert par dage (afhænger af hvor hurtigt cellerne vokser). Efter at klæbende celler vokser til at optage 95% af overfladen af en skål, er det tid til at “passere” celler til en anden skål. Hvad vi gør er at løsne celler, lave en homogen suspension og tælle antallet af celler. Antallet af celler er meget vigtigt for cellekultur. Celler vokser måske ikke særlig godt eller dør, hvis du har for få celler i en skål. Derfor er evnen til at tælle cellenummeret en grundlæggende færdighed for cellekultur.,
Hvor kan man købe et hæmocytometer
Ama .on er et godt sted at starte. Du kan finde en række hæmocytometre med forskellige prisklasser og kvaliteter hos Ama .on. Rs ‘videnskab tilbyder også et ” alt i et kit”, der leveres med et hæmocytometer, dækglas, Trypanblåt og methylenblåt for at evaluere cellelevedygtigheden og prøveglas, fine tip transfer pipetter, linsepapirhæfte. Alle de ting, du har brug for for at komme i gang, er i et sæt.
Leave a Reply