Partajarea este grijuliu!
(update 6/07/2020)
Acest articol se referă la
Ce este un hemocytometer
hemocytometer este o camera de numărare dispozitiv proiectat inițial pentru numărarea celulelor sanguine (numele de „hemo” înseamnă sânge). Hemocitometrul este ca un diapozitiv de specimen gros, cu o grilă gravată pe el., Când capacul este plasat pe hemocitometru, capacul ține proba la o înălțime specifică (de obicei 0,1 mm). grila are, de asemenea, dimensiuni specifice, prin urmare, volumul din cameră poate fi calculat. Deoarece puteți număra numărul de celule din zona grilelor și volumul este cunoscut, concentrația celulelor din eșantion poate fi determinată cu ușurință. Mai jos este o ilustrare a unui hemocitometru.,
Cum să utilizați un hemocytometer de a număra celulele
- Pregătirea eșantionului
Amestecarea probei înainte de a lua probe. Evitați aglomerările.concentrația celulelor nu trebuie să fie prea mare sau prea mică. Dacă concentrația celulelor este prea mare, este greu să numărați celulele vizual sub microscop. Dacă concentrația celulei este prea mică, trebuie să numărați mai multe pătrate și poate de mai multe ori pentru a evita erorile statistice., Dacă concentrația celulară este prea mare, încercați să faceți 1:10, 1:100, 1:1000 diluții seriale (vezi ilustrația de mai jos).
- introducerea suspensiei celulare
plasați capacul peste suprafața de numărare. Introduceți suspensia celulară (10 µL sau o picătură) de la marginea lamei de acoperire cu o pipetă fină de transfer a vârfului. Forța capilară va trage lichidul pentru a umple zona de sub capac. Trebuie introdus suficient lichid, astfel încât suprafața de numărare să fie acoperită.,
- numărarea celulelor
folosind un microscop, concentrați-vă pe liniile de grilă ale zonei de numărare cu un obiectiv de 5-10x. Numărați celulele într-un set de 16 pătrate (zona pătrată 1×1 mm; Zona Albastră). Ar trebui să setați o regulă de numărare.
De exemplu, numărați celulele de pe liniile de sus și de stânga ale unui pătrat (marcate cu linia verde), dar nu numărați celulele de pe liniile de jos și drepturile unui pătrat (marcate cu linia roșie). Mutați hemocitometrul la următorul set de 16 pătrate de colț și continuați să numărați până când sunt numărate toate cele 4 seturi de 16 pătrate., Luați imaginea de mai jos ca exemplu, numerele de celule de 4 seturi de 16 pătrate sunt 3, 5, 6, respectiv 4. Prin urmare, în medie, numărul de celule de acest numărare este (3+5+6+4)/4 = 4.5
- Calcularea concentrația de celule
Pentru a calcula numărul de celule per mL: media numărului de celule din fiecare dintre seturile de 16 pătrate de colț. Înmulțiți cu 10.000. Valoarea finală este numărul de celule / mL din suspensia celulară inițială, dacă nu există diluție. În acest caz, numărul mediu de celule pe care l-ați calculat mai sus este de 4,5, apoi înmulțiți cu 10.000., Prin urmare, 4,5*10.000 = 45.000. Concentrația este de 45.000 celule/mL. Dacă aceasta este o diluție de 10 ori, va trebui să înmulțiți cu 10; aduceți-o înapoi la 450.000 celule/mL.
puteți vedea, de asemenea, un videoclip demo aici.
cum se utilizează un hemocitometru pentru a determina viabilitatea celulelor
Trypan blue este un colorant utilizat pentru a distinge între celulele vii și cele moarte. Este o pată vitală care nu este absorbită de celulele viabile sănătoase, dar pătează celulele cu o membrană celulară deteriorată. Prin urmare, numai celulele moarte pot fi colorate ca albastru și pot fi văzute sub microscop., Această metodă este denumită metoda de excludere a colorantului.
Pentru a determina viabilitatea celulelor, vom folosi aceeași metodă ca și celula de numărare. Singura diferență este că trebuie să amestecați suspensia celulară cu colorantul Albastru Trypan înainte de a introduce suspensia celulară la hemocitometru. Să începem!
1. Efectuarea diluțiilor adecvate
ca ceea ce am discutat mai sus, diluțiile adecvate vă vor ușura viața de numărare. Prea mult sau prea puțin de celule nu este bun pentru numărare.
2., Amestecarea volumului egal de suspensie celulară și cel al colorantului Albastru Trypan
concentrația de albastru Trypan este de 0,4% (g/g). Concentrația de lucru este de 0,2%; acesta este motivul pentru care amestecăm un volum egal de suspensie celulară cu un volum egal de 0,4% Albastru tripan. Amintiți-vă că concentrația de celule acum este diluat de 2 ori!
3. Introducerea suspensiei celulare
așezați capacul peste suprafața de numărare. Introduceți suspensia celulară (10 µL sau o picătură) de la marginea lamei de acoperire cu o pipetă fină de transfer a vârfului. Așteptați 1 min, permițând celulelor să se așeze.
4., Numărarea viabilității celulare
folosind un microscop, concentrați-vă pe liniile de rețea ale zonei de numărare cu un obiectiv de 5-10x. Acum Puteți vedea că unele celule sunt transparente, strălucitoare, cu formă rotundă și netedă. Acestea sunt celule sănătoase și vii. Puteți vedea, de asemenea, unele celule sunt albastre în interior, cu un contur foarte dur în forma lor. Acestea sunt celule nesănătoase și moarte. După ce sunteți încrezători să le distingeți, puteți începe să numărați numărul de celule vii și celule moarte.
să luăm un exemplu din imaginea de mai jos.
numărul de celule vii (celule albe) sunt (2, 5, 5, 3) în 4 pătrate Albastru deschis.,
numărul mediu de celule vii sunt (2+5+5+3)/4 = 3.75.
numărul de celule moarte (celule albastre) sunt (1, 0, 1, 1) în 4 pătrate Albastru deschis.
numărul mediu de celule moarte este (1+0+1+1)/4 = 0.75rin urmare, viabilitatea celulară se calculează astfel:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, care este de 83%.
Hemocytometer aplicații
Estima dimensiunea celulei
Deoarece grila are o anumită dimensiune, unele linii sunt de 0,25 mm în între; unele linii sunt 0.,05 mm între ele (vezi imaginea de mai jos). Prin urmare, puteți estima cu ușurință dimensiunea celulelor. Dacă doriți să determinați mai precis dimensiunea celulei, puteți face o imagine a imaginii sub microscop. Apoi, utilizați software – uri, cum ar fi imaginea J, unde puteți spune software-ului „o lungime fixă este egală cu 1 mm”. Acesta va converti și va calcula dimensiunea celulei pentru dvs.
de a Efectua o globule
hemocytometer inițial a fost proiectat pentru hemoleucograma., Sângele nostru este format din globule roșii, globule albe și trombocite. Numărul de celule și compoziția fiecărui tip de celulă pot spune unui medic starea dumneavoastră de sănătate a corpului. De exemplu, scăderea numărului de globule roșii provoacă sentimente de oboseală și slăbiciune (anemie). O creștere a numărului de celule albe din sânge poate indica infecții, alergii, inflamații sau alte boli. Prin urmare, un hemocitometru este un instrument foarte important în laboratorul de testare medicală datorită capacității sale de a număra numărul de celule și compoziția fiecărui tip de celulă.,când cresc celulele în laborator, trebuie să schimb mediul celular la fiecare două zile (depinde de cât de repede cresc celulele). După ce celulele aderente cresc pentru a ocupa 95% din suprafața unui vas, este timpul să „treceți” celulele într-un alt vas. Ceea ce facem este să detașăm celulele, să facem o suspensie omogenă și să numărăm numărul de celule. Numărul de celule este foarte important pentru cultura celulară. Este posibil ca celulele să nu crească foarte bine sau să moară dacă aveți prea puține celule într-un vas. Prin urmare, capacitatea de a număra numărul de celule este o abilitate fundamentală pentru cultura celulară.,
de unde să cumpărați un hemocitometru
Amazon este un loc bun pentru a începe. Puteți găsi o varietate de hemocitometre cu diferite game de prețuri și calități la Amazon. Rs’ Știința oferă, de asemenea, un „all in one kit”, care vine cu un hemocytometer, lamelă de acoperire, Trypan Blue și Albastru de Metilen pentru a evalua viabilitatea celulară și flacoane eșantion, vârful fin transfer pipete, lentile de hârtie broșură. Toate lucrurile de care aveți nevoie pentru a începe sunt într-un singur kit.
Leave a Reply