A megosztás gondoskodik!
(frissítés 6/07/2020)
Ez a cikk tartalmazza a
Mi is az a hemocytometer
A hemocytometer egy számolja kamra eszközt eredetileg a számolás vérsejtek (a név, hogy “ákos” azt jelenti, vér). A hemocitométer olyan, mint egy vastag mintadarab, amelyen rács van gravírozva., Amikor a fedőlapot a hemocitométerre helyezzük, a fedéllip egy adott magasságban (általában 0,1 mm) tartotta a mintát.
a rácsnak sajátos méretei is vannak, ezért a kamrában lévő térfogat kiszámítható. Mivel a rácsok területén a sejtek számát meg lehet számolni, a térfogat ismert, a mintában lévő sejtek koncentrációja könnyen meghatározható. Az alábbiakban egy hemocitométer illusztrációja látható.,
hogyan kell a hemocitométert használni a sejtek számlálásához
- minta előkészítése
A minta előkészítése a minták vétele előtt. Kerülje a csomókat.
- megfelelő hígítások készítése
a sejtek koncentrációja nem lehet túl magas vagy túl alacsony. Ha a sejtkoncentráció túl magas, nehéz a sejteket vizuálisan számolni a mikroszkóp alatt. Ha a sejtkoncentráció túl alacsony, akkor a statisztikai hibák elkerülése érdekében több négyzetet, esetleg több alkalommal kell számolni., Ha a sejtkoncentráció túl magas, próbálja meg 1:10, 1:100, 1:1000 soros hígítások (lásd az alábbi ábrát).
- a sejtszuszpenzió bevezetése
helyezze a fedőlapot a számlálási felület fölé. Vezesse be a sejt szuszpenziót (10 µL vagy egy csepp) a fedél széléről egy finom hegyátviteli pipettával. A kapilláris erő húzza a folyadékot, hogy kitöltse a területet a fedél alattlip. Elegendő folyadékot kell bevezetni, hogy a számlálási felület csak lefedje.,
- a sejtek számlálása
mikroszkóp segítségével fókuszáljon a számlálási terület rácsvonalaira 5-10x objektívvel. Számolja meg a cellákat egy 16 négyzetből álló készletben (1×1 mm négyzet; a kék terület). Be kell állítania egy számlálási szabályt.
például számolja meg a négyzet felső és bal oldalán lévő cellákat (zöld vonallal jelölve), de ne számolja meg a négyzet alján lévő cellákat, valamint a négyzet jobb vonalait (a piros vonal jelöli). Mozgassa a hemocitométert a következő 16 sarok négyzetre, majd folytassa a számítást, amíg mind a 4 16 négyzetet meg nem számolják., Vegyük például az alábbi képet, a 4 db 16 négyzetből álló cellaszám 3, 5, 6, 4. Ezért az átlagos telefonszáma, e számolni (3+5+6+4)/4 = 4.5
- Kiszámítása a sejt koncentráció
számának kiszámítására sejt / mL: Vegyünk egy átlagos sejtszám minden a készlet 16 sarokban négyzetek. Szorozzuk meg 10 000-rel. A végső érték az eredeti sejtszuszpenzióban lévő sejtek/mL száma, ha nincs hígítás. Ebben az esetben a fent kiszámított átlagos cellaszám 4,5, majd szorozzuk meg 10 000-rel., Ezért 4,5*10,000 = 45,000. A koncentráció 45 000 sejt / mL. Ha ez egy 10-szeres hígítás, akkor 10-szer kell szorozni; hozza vissza 450 000 sejt/mL-re.
itt egy demo videót is láthat.
A hemocitométer használata a sejtek életképességének meghatározására
a Trypan blue olyan festék, amelyet az élő és az elhalt sejtek megkülönböztetésére használnak. Ez egy létfontosságú folt, amelyet az egészséges életképes sejtek nem szívnak fel, de a sérült sejtmembránnal rendelkező sejteket foltolja. Ezért csak az elhalt sejteket lehet kék színűre festeni, a mikroszkóp alatt látható., Ezt a módszert festékkizárási módszernek nevezik.
a sejt életképességének meghatározásához ugyanazt a módszert használjuk, mint a sejtszámlálás. Az egyetlen különbség az,hogy a sejtszuszpenziót Trypan kék festékkel kell összekeverni, mielőtt a sejtszuszpenziót a hemocitométerhez vezetnék. Kezdjük!
1. Megfelelő hígítások készítése
mint amit fent tárgyaltunk, a megfelelő hígítások megkönnyítik a számlálási életet. Túl sok vagy túl kevés sejt nem jó a számláláshoz.
2., Egyenlő térfogatú sejt szuszpenzió és Trypan kék festék keverése
a Trypan kék koncentrációja 0,4% (m/m). A munkakoncentráció 0,2%; ez az oka annak, hogy egyenlő mennyiségű sejtszuszpenziót keverünk 0,4% Trypan kék egyenlő térfogattal. Ne feledje, hogy a sejtkoncentráció most hígítjuk 2-szer!
3. A sejt szuszpenzió bevezetése
helyezze a fedőlapot a számlálási felület fölé. Vezesse be a sejt szuszpenziót (10 µL vagy egy csepp) a fedél széléről egy finom hegyátviteli pipettával. Várjon 1 percig, hogy a sejtek telepedjenek.
4., A sejt életképességének számlálása
mikroszkóp segítségével összpontosítson a számlálási terület rácsvonalaira 5-10x objektívvel. Most láthatjuk, hogy néhány sejt átlátszó, fényes, kerek, sima alakú. Ezek egészséges és élő sejtek. Azt is láthatja, hogy néhány sejt kék belül van, nagyon durva vázlattal az alakjukban. Ezek egészségtelen és elhalt sejtek. Miután biztos benne, hogy megkülönböztesse őket, elkezdheti számolni az élő sejtek és az elhalt sejtek számát.
Vegyünk egy példát az alábbi képre.
az élő sejtek (fehér sejtek) száma (2, 5, 5, 3) 4 Világoskék négyzetben.,
az élő sejtek átlagos száma(2+5+5+3)/4 = 3.75.
az elhalt sejtek (kék sejtek) száma (1, 0, 1, 1) 4 Világoskék négyzetben.
az elhalt sejtek átlagos száma(1+0+1+1)/4 = 0.75
ezért a sejt életképességét a következőképpen kell kiszámítani:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, ami 83%.
Hemocitométer alkalmazások
becsülje meg a cellaméretet
mivel a rácsnak sajátos dimenziója van, egyes vonalak között 0,25 mm; egyes vonalak a 0.,05 mm között (lásd az alábbi képet). Ezért könnyen becsülheti meg a sejtek méretét. Ha pontosabban meg akarja határozni a cellaméretet, akkor mikroszkóp alatt képet készíthet a képről. Ezután használjon olyan szoftvereket, mint például a j Kép, ahol elmondhatja a szoftvernek: “a rögzített Hosszúság 1 mm”. Átalakítja és kiszámítja a cellaméretet az Ön számára.
a vérsejtszám mérésére eredetileg a hemocitométert tervezték., Vérünk vörösvérsejtekből, fehérvérsejtekből és vérlemezkékből áll. A sejtszám és az egyes sejttípusok összetétele megmondja az orvosnak a test egészségi állapotát. Például az alacsony vörösvérsejtszám okoz fáradtság és gyengeség (vérszegénység). A fehérvérsejtek számának növekedése fertőzésre, allergiára, gyulladásra vagy más betegségekre utalhat. Ezért a hemocitométer nagyon fontos eszköz az orvosi vizsgálólaboratóriumban, mivel képes számolni a sejtek számát és az egyes sejttípusok összetételét.,
végezze sejtszám sejttenyészet
amikor növekszik sejtek a laborban, meg kell változtatni a sejt közeg minden pár nap (attól függ, hogy milyen gyorsan a sejtek nőnek). Miután a tapadó sejtek az edény felületének 95% – át elfoglalják, itt az ideje, hogy a sejteket egy másik edénybe “átadják”. Azt tesszük, hogy leválasztjuk a sejteket, homogén szuszpenziót készítünk, és megszámoljuk a sejtek számát. A sejtek száma nagyon fontos a sejttenyészet számára. A sejtek nem nőnek túl jól, vagy meghalnak, ha túl kevés sejt van egy edényben. Ezért a sejtszám számításának képessége alapvető képesség a sejtkultúra számára.,
hol lehet megvásárolni a hemocitométert
az Amazon jó hely a kezdéshez. Megtalálható a különböző hemocytométerek különböző árkategóriákban, tulajdonságok az Amazon. Rs’ Tudomány is kínál egy “all in one csomagot”, amely tartalmaz egy hemocytometer, lefedő, Trypan Kék-Metilén Kék értékelni a sejtek életképességét, illetve minta üveg, jó tipp, átutalás pipetták, lencse, papír, füzet. Minden dolog, amit el kell kezdeni, egy készletben van.
Leave a Reply