공유가 신경 쓰입니다!
(업데이트 6/07/2020)
솔루션을 제공합니다.
는 무엇입 hemocytometer
hemocytometer 은 세 챔버 장치를 원래 설계를 위한 계산 혈구(이름은”과”의 뜻은 혈액). 혈구계는 그 위에 격자가 새겨진 두꺼운 표본 슬라이드와 같습니다., Coverslip 가 hemocytometer 에 둘 때,coverslip 는 특정한 고도(전형적으로 0.1mm)에 있는 표본을 붙들었습니다. 그리드는 또한 특정 치수를 가지므로 챔버 내의 부피를 계산할 수 있습니다. 할 수 있으므로 수 세포의 영역에서의 격자와 볼륨 농도의 세포에서 샘플을 쉽게 확인할 수 있습니다. 아래는 혈구계의 그림입니다.,
를 사용하는 방법 hemocytometer 계산세포
- 준비하는 샘플
섞는 샘플을 잘 복용하기 전에 샘플입니다. 덩어리를 피하십시오.
- 적절한 희석
농도의 세포이 너무 높거나 너무 낮습니다. 세포 농도가 너무 높으면 현미경으로 시각적으로 세포를 계산하기가 어렵습니다. 는 경우 셀 농도가 너무 낮은,당신은 필요한 계산을 더 많은 사각형하고 아마도 더 많은 시간을 방지하는 통계 오류가 있습니다., 세포 농도가 너무 높으면 다음을 시도하십시오 1:10, 1:100, 1:1000 직렬 희석(아래 그림 참조).
- 셀 현탁액 도입
coverslip 을 계수 표면 위에 놓습니다. 미세한 팁 전달 피펫으로 커버 슬립의 가장자리에서 셀 현탁액(10μl 또는 1 방울)을 도입하십시오. 모세관 힘은 coverslip 의 밑에 지역을 채우기 위하여 액체를 끌 것입니다. 카운팅 표면이 방금 덮일 수 있도록 충분한 양의 액체를 도입해야합니다.,
- 세포를 세기
현미경을 사용하여,5-10x 목표를 가진 세는 지역의 격자 선에 집중하십시오. 16 개의 사각형(1×1mm 사각형 영역,파란색 영역)의 한 세트로 셀을 계산합니다. 계산 규칙을 설정해야합니다.
예를 들어,수은 세포에 위쪽과 왼쪽의 스퀘어(에 의해 표시되 green line),그러나 포함되지 않는 세포 그리고 바닥에 권리의 광장(에 의해 표시되 red line). 혈구계를 16 개의 모서리 사각형의 다음 세트로 이동하고 16 개의 사각형 4 세트가 모두 계산 될 때까지 계속 계산하십시오., 아래 사진을 예로 들어 16 개의 사각형 4 세트의 셀 번호는 각각 3,5,6,4 입니다. 따라서,평균 세포의 숫자가 이 계산(3+5+6+4)/4 = 4.5
- 을 계산하는 세포의 농도
의 수를 계산당 셀 mL:평균을 세포에서 계산 세트의 각 16 코너 사각형입니다. 10,000 을 곱하십시오. 최종 값은 희석이없는 경우 원래 세포 현탁액의 세포 수/mL 입니다. 이 경우 위에서 계산 한 평균 셀 수는 4.5 이고 10,000 을 곱합니다., 따라서,4.5*10,000=45,000. 농도는 45,000 세포/mL 입니다. 이것이 10 배 희석 인 경우에,당신은 10 에 의해 곱할 필요가있을 것이다;450,000 세포/mL 로 다시 가져 오십시오.
여기에서 데모 비디오를 볼 수도 있습니다.
를 사용하는 방법 hemocytometer 을 결정하는 세포 생존 능력
Trypan blue dye 을 구별하는 데 사용 live and dead cells. 그것은 건강한 생존 가능한 세포에 흡수되지 않는 중요한 얼룩이지만 손상된 세포막으로 세포를 얼룩지게합니다. 따라서 죽은 세포 만 파란색으로 염색 할 수 있으며 현미경으로 볼 수 있습니다., 이 방법을 염료 배제 방법이라고합니다.
를 결정한 세포 생존 능력,우리가 사용하는 방법과 동일한 방법으로 세포 계산합니다. 유일한 차이점은 세포 현탁액을 혈구계에 도입하기 전에 세포 현탁액을 트리판 블루 염료와 혼합해야한다는 것입니다. 시작하자!<피>1. 적절한 희석.
처럼 우리가 위에서 설명한 적절한 희석 것을 믿습니다. 세포가 너무 많거나 너무 적 으면 계산에 좋지 않습니다.
2., 동일한 부피의 세포 현탁액과 트리판 블루 염료의 혼합
트리판 블루의 농도는 0.4%(w/w)이다. 작업 농도가 0.2%;는 이유입니다 우리는 혼합의 동량 서스펜션 휴의 동량 0.4%Trypan blue. 당신의 세포 농도가 이제 2 배 희석된다는 것을 기억하십시오!
3. 셀 현탁액 소개
coverslip 을 계수 표면 위에 놓습니다. 미세한 팁 전달 피펫으로 커버 슬립의 가장자리에서 셀 현탁액(10μl 또는 1 방울)을 도입하십시오. 세포가 정착 할 수 있도록 1 분 동안 기다리십시오.
4., 세포 생존력 계산
현미경을 사용하여 5-10x 목표로 계수 영역의 그리드 선에 초점을 맞 춥니 다. 이제 일부 셀이 투명하고 반짝이며 둥글고 매끄러운 모양을 볼 수 있습니다. 이들은 건강하고 살아있는 세포입니다. 당신은 또한 몇몇 세포가 그들의 모양에있는 진짜로 거친 개략과 더불어 안쪽에 파란다는 것을 볼 수있다. 이들은 건강에 해롭고 죽은 세포입니다. 후에 당신은 자신감을 구별하는 그들이,당신이 계산을 시작할 수 있습니다 숫자의 라이브세포가 없습니다.
아래 그림의 예를 들어 보겠습니다.
살아있는 세포(백색 세포)의 수는 4 개의 밝은 파란색 사각형의(2,5,5,3)입니다.,
살아있는 세포의 평균 카운트는(2+5+5+3)/4 = 3.75.
죽은 세포(파란색 세포)의 수는 4 개의 밝은 파란색 사각형의(1,0,1,1)입니다.
평균 수의 죽은 세포이(1+0+1+1)/4 = 0.75
그러므로 세포 생존 능력을 다음과 같이 계산합니다.
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, 는 83%.
Hemocytometer 응용 프로그램
예상 셀 크기
기 때문에 그리드는 특정 차원에 있는 0.25mm 에서 사는 일부선은 0 입니다.,사이 05mm(아래 이미지 참조). 따라서 셀 크기를 쉽게 추정할 수 있습니다. 세포 크기를보다 정확하게 결정하려는 경우 현미경으로 이미지의 사진을 찍을 수 있습니다. 그런 다음 이미지 J 와 같은 소프트웨어를 사용하여 소프트웨어에”고정 길이는 1mm 와 같습니다”라고 말할 수 있습니다. 그것은 당신을 위해 셀 크기를 변환하고 계산합니다.
을 수행하혈
hemocytometer 처음에 설계를 위한 혈액을 계산합니다., 우리의 혈액은 적혈구,백혈구 및 혈소판으로 구성됩니다. 세포 수와 각 세포 유형의 구성은 의사에게 신체 건강 상태를 알려줄 수 있습니다. 예를 들어,적혈구 수가 낮 으면 피로와 약화(빈혈)가 느껴집니다. 백혈구 수의 증가는 감염,알레르기,염증 또는 기타 질병을 나타낼 수 있습니다. 따라서 혈구계는 세포 수와 각 세포 유형의 구성을 세는 능력 때문에 의료 시험 실험실에서 매우 중요한 도구입니다.,
을 수행하 세포수에 대한 세포 배양
때 나는 세포 성장,실험실에서 나를 변경해야 하는 세포간의 모든 부부의 날(는 방법에 따라 빠르 세포 성장). 부착 세포가 접시 표면의 95%를 차지하도록 성장한 후에는 세포를 다른 접시에”통과”할 때입니다. 우리가하는 일은 세포를 분리하고,균질 한 현탁액을 만들고,세포의 수를 세는 것입니다. 세포의 수는 세포 배양에 매우 중요합니다. 접시에 세포가 너무 적 으면 세포가 잘 자라지 않거나 죽을 수도 있습니다. 따라서 세포 수를 세는 능력은 세포 배양을위한 근본적인 기술입니다.,
혈구계 구입처
아마존은 시작하기에 좋은 곳입니다. 아마존에서 다양한 가격대와 품질을 가진 다양한 혈구계를 찾을 수 있습니다. Rs’과학 또한 제공”하나에 모든 키트”함께 hemocytometer,coverslip,Trypan Blue 및 메틸렌 블루을 평가하 세포 생존 능력과 샘플 병,좋은 팁을 전송 피펫,렌즈책자. 시작하기 위해 필요한 모든 것들이 하나의 키트에 있습니다.
Leave a Reply