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(Update 6/07/2020)
Dieser Artikel behandelt
Was ist ein Hämozytometer
Das Hämozytometer ist ein Zählkammergerät? entwickelt zum Zählen von Blutzellen (der Name „Hemo“ bedeutet Blut). Das Hämozytometer ist wie ein dicker Probenschieber mit einem darauf eingravierten Gitter., Wenn der Coverslip auf dem Hämozytometer platziert wird, hielt der Coverslip die Probe in einer bestimmten Höhe (typischerweise 0,1 mm).
Das Gitter hat auch spezifische Abmessungen, daher kann das Volumen in der Kammer berechnet werden. Da Sie die Anzahl der Zellen im Bereich der Gitter zählen können und das Volumen bekannt ist, kann die Konzentration der Zellen in der Probe leicht bestimmt werden. Unten ist eine Illustration eines Hämozytometers.,
Verwendung eines Hämozytometers zum Zählen von Zellen
- Vorbereiten der Probe
Mischen der Probe vor dem Entnehmen der Proben. Klumpen vermeiden.
- Geeignete Verdünnungen durchführen
Die Konzentration der Zellen sollte nicht zu hoch oder zu niedrig sein. Wenn die Zellkonzentration zu hoch ist, ist es schwierig, Zellen visuell unter dem Mikroskop zu zählen. Wenn die Zellkonzentration zu niedrig ist, müssen Sie mehr Quadrate und möglicherweise mehrmals zählen, um statistische Fehler zu vermeiden., Wenn die Zellkonzentration zu hoch ist, versuchen Sie zu tun 1:10, 1:100, 1:1000 serielle Verdünnungen (siehe Abbildung unten).
- Einführung der Zellsuspension
Legen Sie die Deckschicht über die Zählfläche. Führen Sie die Zellsuspension (10 µL oder ein Tropfen) mit einer Transferpipette mit feiner Spitze vom Rand des Deckflügels ein. Die Kapillarkraft zieht die Flüssigkeit, um den Bereich unter der Deckschicht zu füllen. Genug Flüssigkeit sollte eingeführt werden, damit die Zählfläche gerade bedeckt ist.,
- Zellen zählen
Fokussieren Sie mit einem Mikroskop auf die Gitterlinien des Zählbereichs mit einem 5-10x-Objektiv. Zählen Sie die Zellen in einem Satz von 16 Quadraten (1×1 mm quadratische Fläche; der blaue Bereich). Sie sollten eine Zählregel festlegen.
Zählen Sie beispielsweise die Zellen in der oberen und linken Zeile eines Quadrats (durch die grüne Linie markiert), aber zählen Sie nicht die Zellen in der unteren und rechten Zeile eines Quadrats (durch die rote Linie markiert). Bewegen Sie das Hämozytometer zum nächsten Satz von 16 Eckquadraten und zählen Sie weiter, bis alle 4 Sätze von 16 Quadraten gezählt sind., Nehmen Sie das Bild unten als Beispiel, die Zellennummern von 4 Sätzen von 16 Quadraten sind 3, 5, 6, 4. Daher ist die durchschnittliche Zellzahl dieser Zählung(3+5+6+4)/4 = 4.5
- Berechnung der Zellkonzentration
Um die Anzahl der Zellen pro mL zu berechnen: Nehmen Sie die durchschnittliche Zellzahl aus jedem der Sätze von 16 Eckquadraten. Multiplizieren Sie mit 10.000. Der Endwert ist die Anzahl der Zellen / ml in der ursprünglichen Zellsuspension, wenn keine Verdünnung vorliegt. In diesem Fall ist die durchschnittliche Zellennummer, die Sie oben berechnet haben, 4,5 und multipliziert dann mit 10.000., Daher, 4.5*10,000 = 45,000. Die Konzentration beträgt 45.000 Zellen / ml. Wenn dies eine 10-fache Verdünnung ist, müssen Sie sich mit 10 multiplizieren; bringen Sie es zurück zu 450.000 Zellen/ml.
Sie können auch ein Demo-Video hier sehen.
Verwendung eines Hämozytometers zur Bestimmung der Zelllebensfähigkeit
Trypanblau ist ein Farbstoff zur Unterscheidung zwischen lebenden und toten Zellen. Es ist ein lebenswichtiger Fleck, der nicht von gesunden lebensfähigen Zellen absorbiert wird, sondern Zellen mit einer beschädigten Zellmembran befleckt. Daher können nur tote Zellen blau gefärbt und unter dem Mikroskop gesehen werden., Diese Methode wird als Farbstoffausschlussmethode bezeichnet.
Um die Lebensfähigkeit der Zelle zu bestimmen, verwenden wir die gleiche Methode wie die Zellenzählung. Der einzige Unterschied besteht darin, dass Sie die Zellsuspension mit dem Trypanblau-Farbstoff mischen müssen, bevor Sie die Zellsuspension in das Hämozytometer einbringen. Lass uns anfangen!
1. Geeignete Verdünnungen machen
Wie das, was wir oben besprochen haben, werden geeignete Verdünnungen Ihr Zählen Leben leichter machen. Zu viel oder zu wenig von Zellen ist nicht gut zum Zählen.
2., Mischen des gleichen Volumens der Zellsuspension und des Trypanblau-Farbstoffs
Die Konzentration von Trypanblau beträgt 0,4% (w/w). Die Arbeitskonzentration beträgt 0,2%; Deshalb mischen wir das gleiche Volumen der Zellsuspension mit einem gleichen Volumen von 0,4% Trypanblau. Denken Sie daran, dass Ihre Zellkonzentration jetzt 2-fach verdünnt wird!
3. Einführung Zellsuspension
Legen Sie den Coverslip über die Zählfläche. Führen Sie die Zellsuspension (10 µL oder ein Tropfen) mit einer Transferpipette mit feiner Spitze vom Rand des Deckflügels ein. Warten Sie 1 min, damit sich die Zellen absetzen können.
4., Zählen der Zelllebensfähigkeit
Mit einem Mikroskop, konzentrieren sich auf die Gitterlinien des Zählbereichs mit einem 5-10x Objektiv. Jetzt können Sie sehen, einige Zellen sind transparent, glänzend, mit runden und glatten Form. Dies sind gesunde und lebende Zellen. Sie können auch sehen, dass einige Zellen innen blau sind, mit einem wirklich groben Umriss in ihrer Form. Dies sind ungesunde und tote Zellen. Nachdem Sie sicher sind, sie zu unterscheiden, können Sie beginnen, die Anzahl der lebenden Zellen und toten Zellen zu zählen.
Nehmen wir ein Beispiel für das Bild unten.
Die Anzahl der lebenden Zellen (weiße Zellen) ist (2, 5, 5, 3) in 4 hellblauen Quadraten.,
Die Durchschnittliche Anzahl der lebenden Zellen sind (2+5+5+3)/4 = 3.75.
Die Anzahl der toten Zellen (blaue Zellen) ist (1, 0, 1, 1) in 4 hellblauen Quadraten.
Die durchschnittliche Anzahl der toten Zellen ist (1+0+1+1)/4 = 0.75
Daher wird die Zelllebensfähigkeit berechnet als:
: 3.75 / (3.75+0.75) = 0.83, das sind 83%.
Hämozytometeranwendungen
Schätzen Sie die Zellgröße
Da das Raster eine bestimmte Dimension hat, sind einige Zeilen 0,25 mm dazwischen; Einige Zeilen sind 0.,05 mm dazwischen (siehe Bild unten). Daher können Sie die Größe der Zellen leicht abschätzen. Wenn Sie die Zellgröße genauer bestimmen möchten, können Sie ein Bild des Bildes unter dem Mikroskop machen. Verwenden Sie dann Software wie Image J, bei der Sie der Software mitteilen können, dass „eine feste Länge gleich 1 mm ist“. Es konvertiert und berechnet die Zellengröße für Sie.
Führen Sie ein Blutbild durch
Das Hämozytometer wurde ursprünglich für das Blutbild entwickelt., Unser Blut besteht aus Roten Blutkörperchen, Weißen Blutkörperchen und Blutplättchen. Die Zellnummer und die Zusammensetzung jedes Zelltyps können einem Arzt Ihren Gesundheitszustand mitteilen. Zum Beispiel verursacht eine niedrige Anzahl roter Blutkörperchen Müdigkeit und Schwäche (Anämie). Eine Erhöhung der Anzahl weißer Blutkörperchen kann auf Infektionen, Allergien, Entzündungen oder andere Krankheiten hinweisen. Daher ist ein Hämozytometer aufgrund seiner Fähigkeit, die Anzahl der Zellen und die Zusammensetzung jedes Zelltyps zu zählen, ein sehr wichtiges Instrument im medizinischen Testlabor.,
Zellzahl für Zellkultur durchführen
Wenn ich Zellen im Labor züchte, muss ich das Zellmedium alle paar Tage wechseln (abhängig davon, wie schnell die Zellen wachsen). Nachdem anhaftende Zellen 95% der Oberfläche einer Schale einnehmen, ist es Zeit, Zellen in eine andere Schale zu „leiten“. Wir lösen Zellen, machen eine homogene Suspension und zählen die Anzahl der Zellen. Die Anzahl der Zellen ist sehr wichtig für die Zellkultur. Zellen wachsen möglicherweise nicht sehr gut oder sterben ab, wenn Sie zu wenige Zellen in einer Schüssel haben. Daher ist die Fähigkeit, die Zellzahl zu zählen, eine grundlegende Fähigkeit für die Zellkultur.,
Wo man ein Hämozytometer kauft
Amazon ist ein guter Anfang. Bei Amazon finden Sie eine Vielzahl von Hämozytometern mit unterschiedlichen Preisklassen und Qualitäten. Rs ‚Science bietet auch ein“ All-in-One-Kit “ an, das mit einem Hämozytometer, Coverslip, Trypanblau und Methylenblau zur Bewertung der Zelllebensfähigkeit und Probenfläschchen, feinen Tip-Transfer-Pipetten, Linsenpapierheft geliefert wird. Alles, was Sie brauchen, um loszulegen, ist in einem kit.
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