ast Updated on February 4, 2021 by Sagar Aryal
It is also know as Ziehl-Neelsen stain.
objectivo da coloração ácida rápida
o objectivo principal desta coloração é diferenciar as bactérias em grupos ácidos rápidos e não ácidos rápidos.,
princípio da rápida coloração ácida
mycobacteria Acid-fast contém ácido micólico na sua membrana exterior, tornando as células cerosas e resistentes à coloração com manchas aquosas, tais como a coloração de Gram. A mancha primária, carbolfuchsina é aplicada às células, e calor e fenol são usados para permitir que a mancha penetre na superfície cerosa de microorganismos ácidos rápidos. A mancha excessiva é removida com tratamento por álcool ácido (etanol e ácido clorídrico). Uma mancha secundária, azul de metileno, é então aplicada às células.,
Ziehl-Neelsen Stain Reagents
Stain Primária: 0,3% Carbol-fuchsin. Dissolver 50 g de fenol em 100 mL de etanol (95%) ou metanol (95%). Dissolver 3 g de fuchsin básico na mistura e adicionar água destilada para levar o volume a 1 L. solução de descoloração: adicionar 30 mL de ácido clorídrico a 1 L de álcool desnaturado a 95%. Arrefecer e misturar bem antes de utilizar. Reagente de descoloração alternativo (sem álcool): adicionar lentamente 250 mL de ácido sulfúrico (pelo menos 95%) a 750 mL de água destilada. Arrefecer e misturar bem antes de usar.Contrastain: 0,3% azul de netileno., Dissolver 3 g de azul de netileno em 1 L de água destilada.procedimento de coloração ácida rápida. preparar e corrigir o esfregaço da amostra antes da coloração.colocar uma pequena tira de papel de coagulação ou de filtro sobre a parte superior da amostra e colocar a lâmina sobre um banho de água quente em ebulição numa superfície de malha.cobre o papel de filtro com a mancha primária, carbolfuchsina. Deixe o escorrega no banho de água durante 3 a 5 minutos. Continue a aplicar a mancha se o papel de filtro começar a secar.,retire o papel de filtro e lave a lâmina com água até que a solução fique límpida.
a Interpretação dos resultados de Ácido Rápido Mancha
Ácido rápido: vermelho Brilhante, de forma intensiva, roxo, Vermelho, em linha reta ou ligeiramente curvada, hastes, ocorrendo isolados ou em pequenos grupos, pode aparecer frisado
Não-ácido rápido: cor Azul; além disso, o material de referência deve mancha azul.
limitações
- o papel de filtro deve permanecer húmido e em contacto com a amostra durante o aquecimento para permitir a penetração adequada da mancha primária.,
- Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.
Examples
Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium
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