Acid Fast Stain-Principe, réactifs, procédure et interprétation des résultats

dernière mise à jour le 4 février 2021 par Sagar Aryal

il est également connu sous le nom de tache Ziehl-Neelsen.

Objectif de l’Acide Rapide Tache

Le but principal objectif de cette tache est de différencier les bactéries dans l’acide rapide du groupe et non acido-groupes.,

principe de la teinture acide rapide

les mycobactéries acides-rapides contiennent de l’acide mycolique dans leur membrane externe, rendant les cellules cireuses et résistantes aux taches à base aqueuse telles que la teinture de Gram. La tache primaire, la carbolfuchsine est appliquée sur les cellules, et la chaleur et le phénol sont utilisés pour permettre à la tache de pénétrer dans la surface cireuse des micro-organismes acido-rapides. L’excès de tache est éliminé par un traitement à l’alcool acide (éthanol et acide chlorhydrique). Une tache secondaire, le bleu de méthylène, est ensuite appliquée sur les cellules.,

réactifs de teinture Ziehl-Neelsen

teinture primaire: 0,3% Carbol-fuchsine. Dissoudre 50 g de phénol dans 100 mL d’éthanol (95%) ou de méthanol (95%). Dissoudre 3 g de fuchsine basique dans le mélange et ajouter de l’eau distillée pour porter le volume à 1 L.
solution de décoloration: ajouter 30 mL d’acide chlorhydrique à 1 L d’alcool dénaturé à 95%. Refroidir et bien mélanger avant utilisation. Réactif décolorant alternatif( sans alcool): ajouter lentement 250 mL d’acide sulfurique (au moins 95%) à 750 mL d’eau distillée. Refroidir et bien mélanger avant utilisation.
contre-teinte: 0,3% de bleu de nethylène., Dissoudre 3 g de bleu de nethylène dans 1 L d’eau distillée.

Procédure d’Acide Rapide Tache

1. Préparer et fixer l’échantillon de frottis avant la coloration.
2. placez une petite bande de papier buvard ou filtre sur le dessus de l’échantillon et placez la lame sur un bain d’eau chaude bouillante sur une surface en maille.
3. couvrir le papier filtre avec la tache primaire, la carbolfuchsine. Laissez la lame au bain-marie pendant 3 à 5 minutes. Continuez à appliquer la tache si le papier filtre commence à sécher.,
4. retirez le papier filtre et rincez la lame avec de l’eau jusqu’à ce que la solution soit claire.
5. passer le décolorant acide-alcool sur la lame pendant environ 10 à 15 secondes.
6. Rincer la lame avec de l’eau.
7. couvrir le frottis avec le bleu de méthylène secondaire ou contrestain, pendant 1 minute.
8. rincer délicatement la lame avec de l’eau.
9. éponger la lame sèche avec du papier bibulous.,

interprétation du résultat de la coloration acide rapide