Ostatnia aktualizacja 4 lutego 2021 przez Sagar Aryal
jest również znany jako plama Ziehl-Neelsen.
Objective of Acid Fast Stain
głównym celem tej plamy jest różnicowanie bakterii w grupy szybko kwasowe i grupy szybko kwasowe.,
zasada Acid Fast Stain
Acid-fast prątki zawierają kwas mykolowy w błonie zewnętrznej, dzięki czemu komórki są woskowate i odporne na barwienie plamami na bazie wody, takimi jak plamy gramowe. Pierwotna plama, karbolfuchsina jest nakładana na komórki, a ciepło i fenol są używane, aby umożliwić plamę przenikanie do woskowej powierzchni mikroorganizmów szybko kwasowych. Nadmiar plam usuwa się za pomocą kwaśnego alkoholu (etanolu i kwasu solnego). Następnie na komórki nakłada się wtórną plamę, błękit metylenowy.,
Odczynniki do odplamiania Ziehl-Neelsen
Odplamiacz podstawowy: 0,3% Karbol-fuksyny. Rozpuścić 50 g fenolu w 100 mL etanolu (95%) lub metanolu (95%). Rozpuścić 3 g zasadowej fuksyny w mieszaninie i dodać wodę destylowaną, aby uzyskać objętość 1 L.
roztwór odbarwiający: dodać 30 mL kwasu solnego do 1 L 95% denaturowanego alkoholu. Ostudzić i dobrze wymieszać przed użyciem. Alternatywny odczynnik odbarwiający (bez alkoholu): powoli dodaj 250 mL kwasu siarkowego (co najmniej 95%) do 750 mL wody destylowanej. Ostudzić i dobrze wymieszać przed użyciem.
przeciwstarzeniowy: 0,3% błękit netylowy., Rozpuścić 3 g błękitu netylenowego w 1 L wody destylowanej.
procedura szybkiego bejcowania kwasami
- przygotować i naprawić rozmaz próbki przed barwieniem.
- umieść mały pasek bibuły lub bibuły filtracyjnej na wierzchu próbki i umieść szkiełko nad gorącą łaźnią wodną na powierzchni siatki.
- papier filtracyjny przykryć pierwotną plamą, karbolfuchsyną. Pozostawić zjeżdżalnię na łaźni wodnej na 3 do 5 minut. Kontynuuj nakładanie plamy, jeśli bibułka filtracyjna zacznie wysychać.,
- wyjąć bibułę filtracyjną i przepłukać szkiełko wodą, aż roztwór będzie przezroczysty.
- Uruchom odbarwiacz kwasowo-alkoholowy nad szkiełkiem przez około 10 do 15 sekund.
- przepłukać szkiełko wodą.
- przykryj smugą wtórną lub kontrastową, błękit metylenowy, przez 1 minutę.
- delikatnie spłukać szkiełko wodą.
- osuszyć szkiełko papierem bibułowym.,
interpretacja wyniku Acid Fast Stain
Acid fast: jasny czerwony do intensywnego fioletu, Czerwony, proste lub lekko zakrzywione pręty, występujące pojedynczo lub w małych grupach, mogą pojawić się zroszony
non-acid fast: niebieski kolor; ponadto materiał tła powinien zabarwić się na niebiesko.
ograniczenia
- bibuła filtracyjna musi pozostawać wilgotna i mieć kontakt z próbką podczas podgrzewania, aby umożliwić prawidłową penetrację pierwotnej plamy.,
- Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.
Examples
Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium
Leave a Reply