Syra Snabbt Fläck – Principen, Reagens, Förfarande och Tolkning av Resultatet

Senast Uppdaterad den 4 februari 2021 med Sagar Aryal

Det är också känt som Ziehl-Neelsen fläcken.

mål för syra snabb fläck

huvudsyftet med denna fläck är att differentiera bakterier till syra snabb grupp och icke-syra snabba grupper.,

principen om syra snabb fläck

syra-snabba mykobakterier innehåller mykolsyra i deras yttre membran, vilket gör cellerna vaxartade och resistenta mot färgning med vattenbaserade fläckar såsom gram fläcken. Den primära fläcken, karbolfuchsin appliceras på cellerna, och värme och fenol används för att tillåta fläcken att tränga in i den vaxiga ytan av syrafasta mikroorganismer. Överskottsfläcken avlägsnas med behandling av syraalkohol (etanol och saltsyra). En sekundär fläck, metylenblå, appliceras sedan på cellerna.,

Ziehl-Neelsen Stain reagens

primär fläck: 0,3% karbol-fuchsin. Lös 50 g fenol i 100 mL etanol (95%) eller metanol (95%). Lös 3 G basisk fuchsin i blandningen och tillsätt destillerat vatten för att få volymen till 1 L.
Avkoloriseringslösning: tillsätt 30 mL saltsyra till 1 l 95% denaturerad alkohol. Kyl och blanda väl före användning. Alternativt avfärgningsreagens (utan alkohol): tillsätt långsamt 250 mL svavelsyra (minst 95%) till 750 mL destillerat vatten. Kyl och blanda väl innan du använder.
Counterstain: 0.3% nethylene blå., Lös upp 3 g nätblått i 1 liter destillerat vatten.

förfarande för syra snabb fläck

1. Förbered och fixa provet smeta före färgning.
2. placera en liten remsa av blotting eller filterpapper över toppen av preparatet, och placera gliden över ett kokande varmt vattenbad på en maskyta.
3. täck filterpapperet med den primära fläcken, carbolfuchsin. Lämna gliden på vattenbadet i 3 till 5 minuter. Fortsätt att applicera fläck om filterpapperet börjar torka.,
4. ta bort filterpapperet och skölj sliden med vatten tills lösningen är klar.
5. kör syra-alkohol decolorizer över bilden i cirka 10 till 15 sekunder.
6. skölj objektglaset med vatten.
7. täck smeten med sekundär eller motstain, metylenblått, i 1 minut.
8. skölj försiktigt objektglaset med vatten.
9. Blot bilden torr med bibulous papper.,

resultat tolkning av syra snabb fläck

syra snabb: klarröd till intensiv lila, röd, rak eller svagt krökta stavar, förekommer var för sig eller i små grupper, kan visas pärlstav
icke-syra snabb: blå färg; dessutom bör bakgrundsmaterial färga blå.

begränsningar

1. filterpapperet måste förbli fuktigt och i kontakt med preparatet under uppvärmning för att möjliggöra korrekt penetration av den primära fläcken.,
2. Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.

Examples

Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium