Säure Schnelle Fleck-Prinzip, Reagenzien, Verfahren und Ergebnis Interpretation

Zuletzt Aktualisiert auf Februar 4, 2021 durch Sagar Aryal

Es ist auch bekannt als Ziehl-Neelsen fleck.

Ziel des säurefesten Flecks

Das Hauptziel dieses Flecks besteht darin, Bakterien in säurefeste und nicht säurefeste Gruppen zu differenzieren.,

Prinzip des säurefesten Flecks

Säurefeste Mykobakterien enthalten Mykolsäure in ihrer äußeren Membran, wodurch die Zellen wachsartig und resistent gegen Flecken auf wässriger Basis wie den Gram-Fleck sind. Der Primärfleck, Carbolfuchsin, wird auf die Zellen aufgetragen, und Wärme und Phenol werden verwendet, damit der Fleck in die wachsartige Oberfläche säurefester Mikroorganismen eindringen kann. Der überschüssige Fleck wird durch Behandlung mit saurem Alkohol (Ethanol und Salzsäure) entfernt. Ein sekundärer Fleck, Methylenblau, wird dann auf die Zellen aufgetragen.,

Ziehl-Neelsen Fleckenreagenzien

Primärfleck: 0,3% Carbol-Fuchsin. Auflösen von 50 g phenol in 100 mL ethanol (95%) oder methanol (95%). Lösen Sie 3 g basisches Fuchsin in der Mischung und fügen Sie destilliertes Wasser hinzu, um das Volumen auf 1 L zu bringen.
Entfärbungslösung: Fügen Sie 30 ml Salzsäure zu 1 L 95% denaturiertem Alkohol hinzu. Vor Gebrauch abkühlen und gut mischen. Alternatives Entfärbungsreagenz (ohne Alkohol): 250 ml Schwefelsäure (mindestens 95%) langsam zu 750 ml destilliertem Wasser geben. Cool und gut mischen, bevor Sie.
Counterstain: 0.3% nethylene blau., Lösen Sie 3 g Nethylenblau in 1 L destilliertem Wasser auf.

Verfahren des säurefesten Flecks

1. Bereiten Sie den Probenabstrich vor dem Färben vor und fixieren Sie ihn.
2. Legen Sie einen kleinen Streifen Löschpapier oder Filterpapier über die Oberseite der Probe und legen Sie den Objektträger über ein kochend heißes Wasserbad auf eine Maschenoberfläche.
3. Bedecken Sie das Filterpapier mit dem Primärfleck Carbolfuchsin. Lassen Sie die Rutsche 3 bis 5 Minuten auf dem Wasserbad. Tragen Sie weiterhin Flecken auf, wenn das Filterpapier zu trocknen beginnt.,
4. Entfernen Sie das Filterpapier und spülen Sie den Objektträger mit Wasser ab, bis die Lösung klar ist.
5. Führen Sie den Säure-Alkohol-Entfärberer etwa 10 bis 15 Sekunden lang über den Schlitten.
6. Die Folie mit Wasser abspülen.
7. Decken Sie den Abstrich 1 Minute lang mit dem sekundären oder Gegenlack Methylenblau ab.
8. Die Folie vorsichtig mit Wasser abspülen.
9. Tupfen Sie die Folie trocken mit bibulous Papier.,

Ergebnis Interpretation von Säure Schnelle Fleck

Säure schnelle: Helle rot zu intensive lila, Rot, gerade oder leicht gebogene stäbe, auftretende einzeln oder in kleinen gruppen, kann erscheinen perlen
Nicht-säure schnelle: Blau farbe; Zusätzlich, hintergrund material sollte fleck blau.

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1. Das Filterpapier muss während des Erhitzens feucht und in Kontakt mit der Probe bleiben, um ein ordnungsgemäßes Eindringen des Primärflecks zu ermöglichen.,
2. Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.

Examples

Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium