Utoljára 2021.február 4-én frissítve: Sagar Aryal
Ziehl-Neelsen stain néven is ismert.
A Savgyors folt
a folt fő célja a baktériumok savgyors csoportokba és nem savas gyorscsoportokba való megkülönböztetése.,
Elve Sav Gyorsan Folt
Sav-gyorsan mycobacteriumok tartalmaznak mycolic sav a külső membrán, hogy a sejtek viaszos szemben ellenálló festés, vizes alapú foltok, mint a Gram-festés. Az elsődleges foltot, a karbolfuchsint alkalmazzák a sejtekre, hővel és fenollal pedig lehetővé teszik, hogy a folt behatoljon a savas gyors mikroorganizmusok viaszos felületébe. A felesleges foltot savas alkohollal (etanollal és sósavval) történő kezeléssel távolítjuk el. Ezután másodlagos foltot, metilénkék, alkalmaznak a sejtekre.,
Ziehl-Neelsen
elsődleges folt: 0,3% Karbol-fuchsin. Oldjunk fel 50 g fenolt 100 mL etanolban (95%) vagy metanolban (95%). Oldjunk fel 3 g bázikus fukszint a keverékben, és adjunk hozzá desztillált vizet, hogy a térfogat 1 l legyen.
színtelenítő oldat: adjunk hozzá 30 mL sósavat 1 liter 95% denaturált alkoholhoz. Használat előtt jól keverjük össze. Alternatív színtelenítő reagens (alkohol nélkül): lassan adjunk hozzá 250 mL kénsavat (legalább 95%) 750 mL desztillált vízhez. Használat előtt jól keverjük össze.
ellentámadás: 0,3% netilén kék., Oldjunk fel 3 g etilén-kéket 1 L desztillált vízben.
savas Gyorsfolt eljárás
- festés előtt készítse elő és rögzítse a mintakenetet.
- helyezzen egy kis csík blotting vagy szűrőpapírt a minta tetejére, majd helyezze a csúszkát forró forró vízfürdőre egy hálós felületre.
- fedje le a szűrőpapírt az elsődleges folttal, a karbolfuchsinnal. Hagyja a csúszkát a vízfürdőn 3-5 percig. Folytassa a foltot, ha a szűrőpapír megszárad.,
- távolítsa el a szűrőpapírt, majd öblítse le a csúszkát vízzel, amíg az oldat tiszta nem lesz.
- kb. 10-15 másodpercig futtassa a sav-alkohol színtelenítőt a csúszdán.
- öblítse le a csúszkát vízzel.
- fedje le a kenetet a másodlagos vagy ellennyomással, metilénkék, 1 percig.
- óvatosan öblítse le a csúszkát vízzel.
- blot a csúszda száraz, kétpólusú papír.,
Eredmény Értelmezése Sav Gyorsan Folt
Sav gyors, Élénk piros, intenzív lila, Piros, egyenes vagy enyhén ívelt rúd, amely önállóan, vagy kis csoportokban, akkor úgy tűnik, gyöngyös
Nem savas, gyorsan: Kék színű; emellett A háttér anyag foltot kék.
- a szűrőpapírnak nedvesnek kell maradnia, és melegítés közben érintkeznie kell a mintával, hogy lehetővé tegye az elsődleges folt megfelelő behatolását.,
- Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.
Examples
Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium
Leave a Reply