Syre Rask Flekken – Prinsippet, Reagenser, Prosedyre og resultattolkning

Sist Oppdatert februar 4, 2021 av Sagar Aryal

Det er også kjent som Ziehl-Neelsen farging.

Målet av Syre Rask Flekken

Det viktigste målet målet med denne flekken er å skille mellom bakterier i syre fast gruppe og ikke-syre rask grupper.,

Prinsippet om Syre Rask Flekken

Syre-rask mykobakterier inneholder mycolic syre i deres ytre membran, noe som gjør cellene voksaktig og motstandsdyktig mot flekker med vandig basert flekker som gramfarging. Den primære flekken, carbolfuchsin brukes til cellene, og varme og fenol er brukt for å tillate flekken å trenge inn i voksaktig overflate av syre-rask mikroorganismer. Overflødig flekken er fjernet med behandling av syre alkohol (etanol og saltsyre). En sekundær flekken, methylene blå, er deretter anvendt til cellene.,

Ziehl-Neelsen Farging Reagenser

Primære Flekken: 0.3% Carbol-fuchsin. Oppløse 50 g fenol i 100 mL etanol (95%) eller metanol (95%). Oppløse 3 g Basic fuchsin i blandingen og tilsett destillert vann for å gi volum til 1 L.
Decolorization Løsning: Tilsett 30 mL saltsyre til 1 L av 95% denaturert alkohol. Kule og bland godt før bruk. Alternative decolorizing reagens (uten alkohol): Sakte legge til 250 mL svovelsyre (minst 95%) til 750 mL destillert vann. Kule og bland godt før bruk.
Counterstain: 0.3% nethylene blå., Oppløse 3 g nethylene blå i 1 L destillert vann.

Prosedyre Syre Rask Flekken

1. Utarbeide og fest prøven smøre før farging.
2. Legg en liten stripe av blotting eller filter papir over toppen av prøven, og plass dekselet over en kokende varmt vannbad på en mesh overflaten.
3. Dekke filter papir med den primære flekken, carbolfuchsin. La dekselet på vannbad i 3 til 5 minutter. Fortsette å gjelde flekken hvis filteret papir begynner å tørke.,
4. Fjern filter papir og skyll lysbilde med vann inntil løsningen går klar.
5. Kjør syre-alkohol decolorizer over lysbildet for omtrent 10 til 15 sekunder.
6. Skyll lysbilde med vann.
7. Dekke smøre med sekundær eller counterstain, methylene blå, for 1 minutt.
8. skyll Forsiktig dekselet med vann.
9. Blot skyv tørr med bibulous papir.,

Resultat Tolkning av Syre Rask Flekken

Syre rask: Lyse rødt for å intensiv lilla, Rød, rett eller svakt buet stenger, forekommer enkeltvis eller i små grupper, kan vises beaded
Ikke-syre rask: Blå farge, I tillegg til bakgrunnsmateriale bør flekken blå.

Begrensninger

1. filter papir må være fuktig, og i kontakt med prøven under oppvarming for å tillate riktig penetrasjon av den primære flekken.,
2. Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.

Examples

Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium