Syre Hurtigt Plet – Princippet, Reagenser, Procedure og Fortolkning af Resultatet

Sidst Opdateret den 4 februar 2021 ved Sagar Aryal

Det er også kender som Ziehl-Neelsen farvning.

formål med syre hurtig plet

hovedformålet med denne plet er at differentiere bakterier i syre hurtig gruppe og ikke-syre hurtige grupper.,

Princip af Syre Hurtigt Pletten

syrefaste mykobakterier indeholder mycolic syre i deres ydre membran, hvilket gør cellerne voksagtig og modstandsdygtig over for pletter med vandbaseret pletter, såsom den Gram-pletten. Den primære plet, carbolfuchsin påføres cellerne, og varme og phenol bruges til at lade pletten trænge ind i den voksagtige overflade af syrefaste mikroorganismer. Den overskydende plet fjernes ved behandling med sur alkohol (ethanol og saltsyre). En sekundær plet, methylenblåt, påføres derefter cellerne.,

Ziehl-Neelsen Farvning Reagenser

den Primære Pletten: 0.3% Carbol-fuchsin. 50 g phenol opløses i 100 mL ethanol (95%) eller methanol (95%). Opløs 3 g basisk fuchsin i blandingen, og tilsæt destilleret vand for at bringe volumenet til 1 L.
Affarvningsopløsning: tilsæt 30 mL saltsyre til 1 L 95% denatureret alkohol. Cool og bland godt inden brug. Alternativ affarvningsreagens (uden alkohol): tilsæt langsomt 250 mL svovlsyre (mindst 95%) til 750 mL destilleret vand. Cool og bland godt inden brug.
Counterstain: 0.3% nethylenblåt., 3 g nethylenblåt opløses i 1 L destilleret vand.

fremgangsmåde ved syrefast farvning

1. Forbered og fastgør prøveudstrygningen inden farvning.
2. anbring en lille strimmel blotting-eller filterpapir over toppen af prøven, og anbring objektglasset over et kogende varmt vandbad på en maskeoverflade.
3. dæk filterpapiret med den primære plet, carbolfuchsin. Lad objektglasset stå på vandbadet i 3 til 5 minutter. Fortsæt med at anvende plet, hvis filterpapiret begynder at tørre.,
4. Fjern filterpapiret, og skyl objektglasset med vand, indtil opløsningen er klar.
5. Kør acid-alcohol decolori .er over objektglasset i cirka 10 til 15 sekunder.skyl objektglasset med vand.
6. dæk smøret med det sekundære eller modskårne methylenblåt i 1 minut.Skyl forsigtigt objektglasset med vand.
7. Blot objektglasset tørt med bibelsk papir.,

Fortolkning af Resultatet af Syre Hurtigt Pletten

Syre hurtigt: Lys rød intensiv lilla, Rød, lige eller svagt buede stænger, der forekommer enkeltvis eller i små grupper, kan forekomme beaded
Non-syre hurtigt: Blå farve; desuden baggrund for materiale, der skal pletten blå.

begrænsninger

1. filterpapiret skal forblive fugtigt og i kontakt med prøven under opvarmning for at muliggøre korrekt indtrængning af den primære plet.,
2. Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.

Examples

Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium