Last Updated on February 4, 2021 by Sagar Aryal
también se conoce como Ziehl-Neelsen stain.
objetivo de la tinción rápida ácida
El objetivo principal de esta tinción es diferenciar las bacterias en grupos rápidos ácidos y grupos rápidos no ácidos.,
principio de Acid Fast Stain
las micobacterias Acid-fast contienen ácido micólico en su membrana externa, haciendo que las células sean cerosas y resistentes a la tinción con tinciones de base acuosa como la tinción de Gram. La tinción primaria, carbolfuchsina se aplica a las células, y el calor y el fenol se utilizan para permitir que la tinción penetre en la superficie cerosa de los microorganismos ácido-rápidos. El exceso de tinción se elimina con tratamiento con alcohol ácido (etanol y ácido clorhídrico). Luego se aplica una tinción secundaria, azul de metileno, a las células.,
reactivos para tinción de Ziehl-Neelsen
tinción Primaria: 0,3% Carbol-fucsina. Disolver 50 g de fenol en 100 mL de etanol (95%) o metanol (95%). Disolver 3 g de fucsina básica en la mezcla y añadir agua destilada para llevar el volumen a 1 L.
solución de decoloración: añadir 30 mL de ácido clorhídrico a 1 L de alcohol desnaturalizado al 95%. Enfriar y mezclar bien antes de usar. Reactivo decolorante alternativo (sin alcohol): agregue lentamente 250 mL de ácido sulfúrico (al menos 95%) a 750 mL de agua destilada. Enfriar y mezclar bien antes de usar.
Contraste: 0.3% nethylene azul., Disolver 3 g de azul netileno en 1 L de agua destilada.
procedimiento de tinción rápida ácida
- Prepare y fije el frotis de la muestra antes de la tinción.
- coloque una pequeña tira de papel secante o filtro sobre la parte superior de la muestra y coloque el portaobjetos sobre un baño de agua caliente hirviendo sobre una superficie de malla.
- cubra el papel de filtro con la mancha primaria, carbolfuchsin. Deje el tobogán en el baño de agua durante 3 a 5 minutos. Continúe aplicando la mancha si el papel de filtro comienza a secarse.,
- retire el papel de filtro y enjuague el portaobjetos con agua hasta que la solución quede transparente.
- ejecute el decolorante ácido-alcohol sobre la diapositiva durante aproximadamente 10 a 15 segundos.
- Enjuague el portaobjetos con agua.
- Cubra el frotis con la secundaria o de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
- enjuague Suavemente el portaobjetos con agua.
- Borrar la diapositiva seca con papel absorbente.,
interpretación del resultado de Acid Fast Stain
Acid fast: rojo brillante a púrpura intenso, rojo, barras rectas o ligeramente curvas, que se producen individualmente o en grupos pequeños, pueden aparecer con cuentas
No ácido fast: Color Azul; además, el material de fondo debe teñirse de azul.
limitaciones
- El papel de filtro debe permanecer húmedo y en contacto con la muestra durante el calentamiento para permitir la penetración adecuada de la mancha primaria.,
- Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.
Examples
Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium
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