laatst bijgewerkt op 4 februari 2021 door Sagar Aryal
Het is ook bekend als Ziehl-Neelsen stain.
doelstelling van Acid Fast Stain
Het hoofddoel van deze vlek is om bacteriën te differentiëren in acid fast group en non-acid fast Group.,
principe van Acid Fast Stain
zuurvaste mycobacteriën bevatten mycolzuur in hun buitenmembraan, waardoor de cellen wasachtig en bestand zijn tegen vlekken op waterbasis, zoals de gramkleuring. De primaire vlek, carbolfuchsin wordt op de cellen aangebracht en warmte en fenol worden gebruikt om de vlek in het wasachtige oppervlak van zuurvaste micro-organismen te laten doordringen. De overtollige vlek wordt verwijderd met behandeling met zure alcohol (ethanol en zoutzuur). Een secundaire vlek, methyleenblauw, wordt vervolgens op de cellen aangebracht.,
Ziehl-Neelsen Stain reagentia
primaire vlek: 0,3% Carbol-fuchsin. Los 50 g fenol op in 100 mL ethanol (95%) of methanol (95%). Los 3 g basisch fuchsine op in het mengsel en voeg gedestilleerd water toe om het volume op 1 L. Ontkleuringsoplossing te brengen: voeg 30 mL zoutzuur toe aan 1 L gedenatureerde alcohol van 95%. Koel af en meng goed voor gebruik. Alternatieve ontkleuringsreagens (zonder alcohol): voeg langzaam 250 mL zwavelzuur (ten minste 95%) toe aan 750 mL gedestilleerd water. Koel af en meng goed voor gebruik.
Counterstain: 0,3% nethyleenblauw., Los 3 G nethyleenblauw op in 1 L gedestilleerd water.
procedure van Acid Fast Stain
- bereid en fixeer het uitstrijkje voor de kleuring.
- plaats een kleine strook bevlekings-of filtreerpapier over de bovenkant van het monster en plaats het objectglaasje over een kokend heet waterbad op een maasvlak.
- bedek het filtreerpapier met de primaire vlek, carbolfuchsine. Laat de glijbaan 3 tot 5 minuten op het waterbad staan. Blijf vlekken aanbrengen als het filtreerpapier begint te drogen.,
- verwijder het filtreerpapier en spoel de glaasje met water totdat de oplossing helder is.
- zuur-alcohol ontkleuringsmiddel gedurende ongeveer 10 tot 15 seconden over het objectglaasje laten lopen.
- spoel het glaasje met water.
- bedek het uitstrijkje gedurende 1 minuut met de secundaire of tegenstain, methyleenblauw.
- spoel het glaasje voorzichtig met water.
- strijk de dia droog met dubbelzijdig papier.,
resultaat interpretatie van Acid Fast Stain
Acid fast: helderrood tot intensief paars, rood, recht of licht gebogen staven, die afzonderlijk of in kleine groepen voorkomen, kunnen kralen vertonen
niet-zuur snel: blauwe kleur; bovendien moet achtergrondmateriaal blauw kleuren.
beperkingen
- het filtreerpapier moet tijdens het verhitten vochtig blijven en in contact blijven met het monster om een goede penetratie van de primaire vlek mogelijk te maken.,
- Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.
Examples
Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium
Leave a Reply