Kyselina Rychlé Skvrna – Zásady, Činidla, Postup a Interpretace výsledků

Naposledy Aktualizován dne 4. února 2021 podle Sagar Aryal

To je také vědět, jak Ziehl-Neelsen skvrnu.

Cíl Kyseliny Rychlé Skvrna

hlavní cíl cílem této skvrny je rozlišit bakterie na kyselinu rychlé skupiny a non-acid rychle skupin.,

Princip Kyselina Rychlé Skvrna

acidorezistentní mykobakterie obsahují mykolové kyseliny v jejich vnější membránu, takže buňky voskovým a odolné proti skvrnám s vodní bázi skvrny, jako je Gramovo barvení. Hlavní skvrna, carbolfuchsin je aplikována na buňky, a teplo a fenol se používá k tomu, aby skvrna proniknout do voskového povrchu acidorezistentní mikroorganismy. Přebytečná skvrna se odstraní ošetřením kyselým alkoholem (ethanolem a kyselinou chlorovodíkovou). Na buňky se pak aplikuje sekundární skvrna, methylenová modř.,

Ziehl-Neelsen Skvrny Činidla

Primární Skvrna: 0.3% Karbol-fuchsinem. 50 g fenolu se rozpustí ve 100 mL ethanolu (95%) nebo methanolu (95%). Rozpustí 3 g Základní fuchsinem ve směsi a přidá se destilovaná voda tak, aby objem na 1 L
Odbarvování Řešení: Přidejte 30 mL kyseliny chlorovodíkové 1 L 95% denaturovaný alkohol. Před použitím dobře ochlaďte a dobře promíchejte. Alternativní odbarvovací činidlo (bez alkoholu): pomalu přidávejte 250 mL kyseliny sírové (nejméně 95%) do 750 mL destilované vody. Před použitím dobře ochlaďte a dobře promíchejte.
Counterstain: 0, 3% nethylenová modř., 3 g nethylenové modři rozpusťte v 1 L destilované vody.

Postup Kyseliny Rychlé Skvrna

1. Připravit a opravit vzorku stěru před barvením.
2. Umístěte malý proužek savý nebo filtrační papír, přes horní část vzorku, a místo snímku nad vroucí vodní lázně na povrch oka.
3. zakryjte filtrační papír primární skvrnou, karbolfuchsinem. Snímek nechte na vodní lázni po dobu 3 až 5 minut. Pokračujte v aplikaci skvrn, pokud filtrační papír začne vyschnout.,
4. odstraňte filtrační papír a skluzavku opláchněte vodou, dokud roztok nezmizí.
5. spusťte dekolorizátor kyseliny a alkoholu přes snímek po dobu přibližně 10 až 15 sekund.
6. slide opláchněte vodou.
7. zakryjte nátěr sekundárním nebo protinádorovým, methylenovou modří, po dobu 1 minuty.
8. snímek jemně opláchněte vodou.
9. slide osušte bibulózním papírem.,

Výsledek Interpretace Kyseliny Rychlé Skvrna

Acid fast: Jasně červená intenzivní fialové, Červené, rovné nebo mírně zakřivené tyčinky, vyskytující se jednotlivě nebo v malých skupinách, se mohou objevit korálky
Non-acid fast: Modrá barva; kromě toho, pozadí, materiál by měl skvrnu modré.

Omezení

1. filtrační papír musí zůstat vlhký a v kontaktu s vzorku během ohřevu, aby byl umožněn řádný pronikání primární skvrnu.,
2. Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.

Examples

Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium