Acid Fast Stain-Principio, reagenti, procedura e interpretazione dei risultati

Ultimo aggiornamento febbraio 4, 2021 da Sagar Aryal

E ‘ anche conosciuto come Ziehl-Neelsen macchia.

Obiettivo di Acid Fast Stain

L’obiettivo principale di questa macchia è quello di differenziare i batteri in gruppi acidi veloci e non acidi veloci.,

Principio di Acid Fast Stain

I micobatteri acido-veloci contengono acido micolico nella loro membrana esterna, rendendo le cellule cerose e resistenti alla colorazione con macchie a base acquosa come la macchia di Gram. La macchia primaria, la carbolfuchsina viene applicata alle cellule e il calore e il fenolo vengono utilizzati per consentire alla macchia di penetrare nella superficie cerosa dei microrganismi acido-veloci. La macchia in eccesso viene rimossa con il trattamento con alcool acido (etanolo e acido cloridrico). Una macchia secondaria, blu di metilene, viene quindi applicata alle cellule.,

Reagenti per macchie Ziehl-Neelsen

Macchia primaria: 0,3% Carbol-fucsina. Sciogliere 50 g di fenolo in 100 ml di etanolo (95%) o metanolo (95%). Sciogliere 3 g di fucsina basica nella miscela e aggiungere acqua distillata per portare il volume a 1 L.
Soluzione di decolorazione: aggiungere 30 ml di acido cloridrico a 1 L di alcool denaturato al 95%. Raffreddare e mescolare bene prima dell’uso. Reagente decolorante alternativo (senza alcool): Aggiungere lentamente 250 ml di acido solforico (almeno il 95%) a 750 ml di acqua distillata. Raffreddare e mescolare bene prima dell’uso.
Counterstain: 0.3% blu di nethylene., Sciogliere 3 g di blu nethylene in 1 L di acqua distillata.

Procedura di colorazione acida

1. Preparare e fissare lo striscio del campione prima della colorazione.
2. Posizionare una piccola striscia di carta assorbente o filtro sulla parte superiore del campione e posizionare il vetrino su un bagno di acqua calda bollente su una superficie a rete.
3. Coprire la carta da filtro con la macchia primaria, carbolfuchsin. Lasciare la diapositiva a bagnomaria per 3-5 minuti. Continuare ad applicare la macchia se la carta da filtro inizia ad asciugarsi.,
4. Rimuovere la carta da filtro e sciacquare il vetrino con acqua fino a quando la soluzione non è limpida.
5. Far scorrere il decolorante acido-alcol sul vetrino per circa 10-15 secondi.
6. Sciacquare il vetrino con acqua.
7. Coprire lo striscio con il secondario o controstenere, blu di metilene, per 1 minuto.
8. Sciacquare delicatamente il vetrino con acqua.
9. Asciugare il vetrino con carta bibulous.,

Interpretazione del Risultato di Acido Macchia

Acido: colore rosso intenso viola, Rosso, diritto o leggermente ricurvo, aste, che si verificano singolarmente o in piccoli gruppi, possono apparire perline
Non acido-veloce: Blu colore; inoltre, il materiale di fondo dovrebbe macchia blu.

Limitazioni

1. La carta da filtro deve rimanere umida e a contatto con il campione durante il riscaldamento per consentire una corretta penetrazione della macchia primaria.,
2. Organisms cultivated on blood agar may experience nutrient deprivation, resulting in a lower lipid content in the outer membrane resulting in poor staining.

Examples

Acid-fast: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium smegmatis.
Non-Mycobacterial bacteria: Nocardia
Coccidian Parasites: Cryptosporidium