Uma Fábrica de Alimentos–Dieta Baseada Modifica o Séricos de β-Sitosterol Concentração em Hyperandrogenic Mulheres pós-menopausa

Resumo

esteróis Vegetais ou fitoesteróis são componentes comuns de alimentos de origem vegetal, especialmente óleos vegetais, sementes e nozes, cereais e leguminosas. Os fitoesteróis mais comuns são o campesterol, O β-sitosterol e o estigmasterol. Os fitoesteróis têm propriedades anticarcinogénicas., Estudos anteriores sugeriram que as populações com baixa incidência de cancro da mama consomem frequentemente dietas com elevado teor de fitoesteróis. O presente estudo avaliou se o consumo de uma dieta à base de alimentos vegetais, baixa em gordura animal, pode aumentar os níveis séricos de fitoesterol em mulheres pós–menopáusicas. Cento e quatro mulheres voluntárias foram aleatorizadas para intervenções dietéticas ou grupos de controle. A intervenção dietética incluiu aconselhamento dietético intensivo para substituir produtos animais por alimentos à base de plantas., Os indivíduos do grupo de intervenção alimentar participaram duas vezes por semana durante 18 semanas em workshops sobre a preparação e o consumo de uma dieta à base de alimentos vegetais. A alteração absoluta na concentração sérica total de fitoesterol foi maior no grupo de intervenção alimentar do que no grupo de controlo. A variação percentual tendeu a diferir entre grupos (P = 0, 06). No entanto, apenas para o β-sitosterol as alterações absolutas e percentuais dentro de um grupo diferem significativamente entre os grupos (P = 0, 0017)., A diminuição do colesterol total sérico no grupo de intervenção alimentar (-14%) foi superior à do grupo controlo (-4%; P = 0, 0005). Os resultados deste estudo mostram que os níveis circulantes de fitoesteróis podem ser afectados pela modificação alimentar. Estes resultados indicam que os fitoesteróis, em particular O β-sitoesterol, podem ser utilizados como biomarcadores da exposição em estudos observacionais ou como indicadores de conformidade em estudos de intervenção dietética de prevenção do cancro.,esteróis vegetais ou fitoesteróis são componentes comuns dos alimentos vegetais, especialmente óleos vegetais, sementes e frutos de casca rija, cereais e leguminosas (1). Os fitoesteróis mais comuns são o campesterol, O β-sitosterol e o estigmasterol. Estruturalmente, estes compostos são semelhantes ao colesterol, exceto para uma cadeia adicional de hidrocarbonetos na posição C-24. O corpo humano não sintetiza endogenamente fitoesteróis. Os fitoesteróis circulantes são derivados exclusivamente através da absorção intestinal (2). Os níveis séricos de fitoesterol no ser humano variam entre 7 e 41 µmol/L (2, 9 a 17, 0 mg/L) (3).,os fitoesteróis podem ter propriedades anticarcinogénicas. Em concentrações de 16 µmol/L (6, 7 mg / L), os fitoesteróis inibem o crescimento e induzem a apoptose nas células do cancro da próstata humana (4). Em experiências in vivo, ratos alimentados com uma dieta suplementada com 0, 3% de β-sitosterol tiveram uma menor incidência de tumores induzidos quimicamente do que os controlos (5). Awad et al. (6) observou-se que o β-sitosterol inibe o crescimento do MBA-MD-231, uma linha do cancro da mama no ser humano., Além disso, estudos recentes indicaram que alimentar ratinhos com SCID (imunodeficiência combinada grave) uma dieta suplementada com fitoesteróis para 8 wk inibe o crescimento do cancro da mama humano em 33% e reduz as metástases em 20% (7). Resultados semelhantes também foram obtidos utilizando células PC3, uma linha de células da próstata humana (8).as populações com baixo risco de cancro da mama consomem mais fitoesteróis dietéticos do que as que apresentam um risco elevado. Por exemplo, os japoneses consomem um alimento à base de plantas e uma dieta pobre em gordura animal que é rica em fitoesteróis. As suas concentrações dietéticas variam entre 8 e 12 µmol / L (3,4 a 5, 0 mg/L)., Os japoneses também têm uma baixa incidência de câncer de mama (9,10). Em contrapartida, as populações com elevada incidência de cancro da mama em países ocidentais, como os Estados Unidos e o norte da Europa (incluindo o norte de Itália), têm um consumo baixo de gorduras vegetais e elevadas que estão associadas a um fitoesterol dietético baixo de 2-6 µmol/L (80-250 mg/d) (9-11). Assim, o consumo de fitoesterol pode explicar, em parte, o efeito protector de uma dieta rica em vegetais na incidência do cancro da mama que foi observado em alguns estudos epidemiológicos (12-13).,

O objectivo do presente estudo foi avaliar o efeito da dieta, e particularmente o efeito de uma dieta à base de alimentos vegetais, baixa em gorduras animais, nos níveis séricos de fitoesterol em mulheres pós–menopáusicas hiperandrogénicas caracterizadas por um elevado risco de cancro da mama devido ao seu perfil endócrino (14). Nós hipotetizamos que um alimento à base de plantas aumentaria os níveis séricos de fitoesteróis, em particular campesterol e β-sitosterol, em uma amostra de conveniência das mulheres.concepção do estudo,

os dados para este estudo vieram de um ensaio controlado aleatorizado realizado em Milão, Itália, de novembro de 1995 a novembro de 1996, o estudo dieta e androgénios (DIANA)2 (15). A divisão de epidemiologia no Istituto Nazionale Tumori (Instituto Nacional italiano do câncer), Milão, Norte da Itália, conduziu o estudo DIANA para avaliar o efeito de uma dieta à base de alimentos vegetais, rica em vegetais e fibras e baixo em gorduras animais e carboidrato refinado, sobre hormônios endógenos, particularmente androgénios séricos, os hormônios sexuais que ligam a globulina e a insulina., Em outubro de 1995, recrutámos participantes através de jornais italianos e anúncios televisivos para este ensaio sobre a dieta e a saúde das mulheres em Milão (uma das maiores cidades industriais da Itália)., Os critérios de elegibilidade foram: 1) ausência de ciclos menstruais durante pelo menos 2 y antes de se matricular em estudo; 2) não anterior ou atual (últimos 6 meses antes do recrutamento no estudo) tratamento hormonal; 3) sem histórico de acordos bilaterais de ovariectomy; 4) sem história pessoal de câncer; 5) não adesão a um vegetariano ou macrobiótico de dieta ou para qualquer outro medicamente prescrita dieta; e 6) nenhum tratamento atual para o diabetes mellitus. Recrutámos um total de 312 mulheres., Todas as mulheres deram consentimento informado por escrito e o Comitê Científico e ético do Istituto Nazionale Tumori em Milão aprovou o estudo.após jejum, as amostras de sangue dos participantes foram colhidas entre 0700 e 0900 h. A testosterona sérica foi medida em todos os 312 participantes. Considerámos um total de 104 mulheres no tertil superior da testosterona sérica (testosterona 13.18 pmol/L) hiperandrogénicas e seleccionámos estas mulheres para o presente estudo porque apresentam um risco aumentado de cancro da mama (14,16)., O hyperandrogenic mulheres foram randomizados em uma intervenção e um grupo de controlo (52 mulheres cada), dentro de blocos de idade (acima ou abaixo de 58 y, a mediana de idade), de prebaseline níveis de testosterona (categorizados em três níveis) e de prebaseline de insulina (três níveis).as mulheres aleatorizadas para o grupo de intervenção alimentar receberam instruções para seguirem a dieta descrita abaixo durante 18 semanas, de fevereiro a junho de 1996. O grupo de controlo recebeu apenas uma recomendação geral para aumentar o consumo de produtos hortícolas e frutas., No início (janeiro de 1996) e no final do período de intervenção (junho de 1996), foram colhidas amostras de sangue após jejum e amostras de urina de 24 horas entre 0700 e 0900 h de todos os 104 participantes. As amostras de soro e urina foram armazenadas a -80°C.

intervenção dietética.As Mulheres do grupo de intervenção alimentar participaram duas vezes por semana em workshops sobre como cozinhar com legumes durante o período de intervenção. Os indivíduos prepararam e consumiram refeições de estudo durante cada oficina.,uma refeição típica incluía uma sopa de legumes ou alguns produtos hortícolas frescos, ocasionalmente incluindo algas, e um prato principal com arroz inteiro, massas ou outros cereais inteiros acompanhados de leguminosas, Produtos Hortícolas crucifixos, outros produtos hortícolas cozinhados ou peixes. Aconselhamos as mulheres a consumir pelo menos uma porção de um produto de soja todos os dias, por exemplo, feijão, tofu, tempeh, soymilk ou miso., Foi dada ênfase à preparação de doces e bolachas com passas, sumo de fruta ou arroz fermentado natural ou malte de cevada em vez de açúcar, com sementes de Flax ou outras sementes em vez de manteiga, e com soimilk em vez de leite de vaca. As mulheres também foram instruídas sobre como substituir as fontes vegetais ricas em proteínas e cálcio pela carne, ovos e produtos lácteos (cada um a ser consumido apenas uma vez por semana)., Além disso, os participantes foram convidados a evitar carboidratos refinados (sacarose, pão branco e pastelaria com base em farinha refinada) e a limitar o sal, mas foram encorajados a temperar alimentos com azeite não refinado e várias sementes (em vez de gorduras lácteas), e a consumir peixe. Todas as semanas, os participantes recebiam um pão de 1 kg de pão feito com trigo integral e 8% de sementes de linho (metade de sementes inteiras, metade moída), ocasionalmente misturado com aveia ou centeio. Os indivíduos consumiram esta dieta ad libitum e não foram aconselhados a reduzir a ingestão de Alimentos (Tabela 1).avaliação da ingestão alimentar.,antes da aleatorização, os participantes completaram um questionário sobre a frequência dos alimentos desenvolvido para o estudo europeu prospectivo sobre o cancro e a nutrição (EPIC) (17). Para monitorizar o cumprimento das recomendações dietéticas, os participantes registaram a frequência de consumo de alimentos seleccionados em diários 24 horas. As mulheres no grupo de intervenção dietética completaram diários 1-d 24 vezes e as mulheres no grupo de controlo, 10 vezes., Estimamos a ingestão absoluta média de nutrientes e energia nos dois grupos, com base em cinco repetidos recalls dietéticos 24-h assistidos por computador, realizados durante o wk 11-16 do estudo, utilizando software desenvolvido para o estudo EPIC (17). O sistema utiliza a base de dados italiana sobre a composição dos alimentos (18). A altura e o peso dos participantes foram medidos no início e no final do estudo.conformidade do estudo

50 das 52 mulheres do grupo de intervenção dietética completaram o programa. Duas mulheres completaram apenas metade do programa., No total, apenas cinco mulheres estiveram ausentes mais de cinco vezes das 36 oficinas e não comeram as refeições preparadas. Excluímos duas mulheres do grupo de controlo por não terem sido submetidas a um exame de acompanhamento. Além disso, três mulheres do grupo de controlo não tinham soro suficiente para as determinações de fitoesterol. Por conseguinte, este estudo incluiu dados de 99 mulheres: 52 na intervenção dietética e 47 no grupo de controlo.análise laboratorial.

para cada replicado ou amostra, foram utilizados 0, 5 mL de soro., 5-α-Colestano (10 µg; Sigma Chemical, St Louis, MO) foi adicionado em todas as réplicas e amostras como um padrão interno, seguido de saponificação com KOH etanólico 1 mol/L e aquecimento a 80°C durante 1 h. esteróis foram extraídos com hexano. GC foi usado para examinar esteróis sem derivação. O GC foi equipado com uma coluna capilar de 0,9 m (modelo EC-5; Alltech, Deerfield, IL) e as temperaturas foram mantidas a 265°C e 300°C para o forno e a porta de injecção, respectivamente. O nitrogênio foi usado como gás portador., A identificação dos Picos foi realizada usando os tempos de retenção de padrões autênticos de esteróis (Sigma Chemical). As áreas sob os picos foram integradas e corrigidas para a recuperação e resposta do GC a diferentes esteróis usando o padrão interno. O colesterol sérico foi medido utilizando um calibrador de colesterol certificado (Sigma Chemical). Todas as determinações foram feitas em duplicado.,

amostras do mesmo indivíduo (baseline e após a conclusão da intervenção) tanto da intervenção como dos grupos de controlo foram analisadas em conjunto por um técnico de laboratório que não tinha conhecimento do tratamento. Assim, como a precisão interna é uma importante fonte de variabilidade técnica, foi avaliada através da análise de duplicados não marcados (a partir de amostras clínicas individuais coletadas de sujeitos de controle) colocados no início, no meio e no final de cada ensaio laboratorial., A variabilidade técnica foi expressa como o coeficiente de correlação intraclass (ICC), um índice de correlação que teve em conta tanto a variabilidade intra como interassaia dos testes analíticos. O ICC para o β-sitosterol foi 0,88 (0,63, limite inferior) e para o campesterol 0,57 (0,15, limite inferior).anteriormente, avaliámos a variabilidade intra-individual do β-sitosterol e do campesterol num estudo realizado no departamento de Medicina Social e preventiva em 1998 (20). Sete mulheres saudáveis pré-menopáusicas foram recrutadas a partir do pessoal do Departamento., Ao longo de um período de 6-mo, cada mulher uma vez por mês após o jejum forneceu uma amostra de sangue na mesma hora do dia, e o mesmo dia numérico de seu ciclo menstrual. O soro foi processado imediatamente após a colheita de sangue e armazenado a -80°C. Todas as amostras de soro do mesmo indivíduo foram processadas ao mesmo tempo pelo mesmo técnico no final do período de 16-mo. A variabilidade intra-individual das horas extraordinárias do campesterol e do β-sitosterol, expressa em ICC, foi de 0,58 (limite inferior de 0,31) e 0,91 (limite inferior de 0,49), respectivamente. Estas conclusões indicavam uma fiabilidade boa a justa destas determinações.,análise estatística.

a análise estatística centrou-se em alterações nas concentrações séricas de β-sitosterol e campesterol, calculadas como a diferença entre os níveis basais e finais do estudo. As alterações médias no grupo de intervenção alimentar foram comparadas com as dos controlos por análise não paramétrica, o teste da soma de Wilcoxon rank (α < 0, 005). As concentrações séricas de fitoesterol e o peso corporal foram estatisticamente comparados utilizando o teste t do Estudante. A versão 8.2 do SAS foi utilizada para a análise estatística.,os hábitos alimentares das mulheres participantes antes da aleatorização, segundo as estimativas do questionário de frequência dos alimentos, mostraram um padrão alimentar típico do Norte da Itália, com 42% de energia proveniente de hidratos de carbono (principalmente de pão e massa) e 37% de gordura (principalmente de carne, produtos lácteos e azeite) (Quadro 1).(21), as entrevistas realizadas a partir de wk 11-16 deste estudo subestimaram ligeiramente a ingestão total de energia no que respeita às necessidades energéticas (21)., Entretanto, os dados mostraram uma menor ingestão energética total no grupo intervenção do que no grupo controle, uma média de 250 kcal/d (1045 kJ/d) (P < 0.004), principalmente devido à menor ingestão de total e gordura saturada. Estes resultados indicam que a ingestão de energia dos sujeitos foi menor do que as necessidades de energia publicadas para a população italiana de mulheres pós-menopáusicas.,de acordo com os diários de frequência dos alimentos compilados durante o estudo, o grupo de intervenção consumiu carne ou produtos à base de carne duas vezes por semana em comparação com uma vez por dia no grupo de controlo, mas consumiu peixe mais frequentemente (3 vezes por semana em comparação com 1,5 nos controlos). O consumo de leite e queijo foi reduzido para metade (0,4 versus 1,0 porções / d) e a manteiga foi praticamente eliminada. Um produto de soja foi consumido pelo grupo de teste uma média de 1,7 vezes / d; sementes de linho, tanto em pão ou biscoitos ou como tal foram consumidos todos os dias (cerca de 8 g/d), e algas marinhas foi consumido todos os dias como ingredientes de vários pratos., O grupo de controle raramente, se alguma vez, consumiu qualquer um destes itens alimentares. O grupo de intervenção, também consumida a seguir com muito mais frequência do que os controles: todo o arroz ou outros grãos inteiros ou integrais produtos à base de cereais (2.5 versus 0,5 vezes a/d), nozes, amêndoas, gergelim e outras sementes (1.2 versus 0.05 vezes/d), legumes (de 0,5 versus 0.1 vezes/d), vegetais crucíferos (0.8 versus 0.1 vezes/d) e frutas (de 0,4 versus 0.1 vezes/d). Outros legumes e frutas foram consumidos quase tão frequentemente pelo grupo de controle quanto pelo grupo de intervenção (2,2 e 2,3 vezes/d, respectivamente).,

a alteração absoluta das concentrações séricas totais de fitoesterol foi maior no grupo de intervenção alimentar do que no grupo de controlo (Quadro 2). A variação percentual tendeu a diferir (P = 0, 06). No entanto, apenas para o β-sitosterol as alterações absolutas e percentuais dentro de um grupo diferem significativamente entre os grupos (P = 0, 0017). Repetimos as análises ajustadas para as concentrações basais de campesterol sérico, β-sitoesterol e fitoesteróis totais e os resultados não diferiram das estimativas não ajustadas (dados não apresentados)., Ajustámos também as análises para o IMC, a relação cintura-quadril e o colesterol no início e os resultados não diferiram dos resultados não corrigidos (dados não apresentados). Os níveis de colesterol Total diminuíram mais no grupo de intervenção (-14%) do que no grupo controlo (-4%; P = 0, 0005). O grupo de intervenção, perdeu mais peso (P < 0.0001) do que o grupo controle: 4.06 kg (gama, -0.6–8,8 kg) vs 0,54 kg (gama, +2.2–5.3 kg).,

discussão

a principal conclusão desta intervenção dietética caracterizada por uma dieta à base de alimentos vegetais em mulheres pós–menopáusicas hiperandrogénicas foi uma alteração maior nos níveis séricos de β-sitosterol em comparação com o grupo de controlo; no entanto, tal não foi observado para campesterol ou para fitoesteróis totais.embora haja evidência de que os fitoesteróis possam ter propriedades anticarcinogénicas (22), desconhece-se o mecanismo pelo qual inibem o crescimento tumoral., No entanto, os investigadores têm colocado a hipótese de que os fitoesteróis podem influenciar o desenvolvimento do cancro alterando as vias de sinalização celular, em particular o ciclo da esfingomielina (SM) (4,23). A ativação desta via por vários agonistas inibe o crescimento (25) e influencia vários outros processos, tais como diferenciação (25), interação célula-célula (25) e apoptose das células tumorais (23,26). A incorporação de fitoesteróis numa linha celular de cancro humana reduz o SM da membrana, sugerindo uma activação do ciclo SM (27).,apesar da evidência experimental e ecológica de um papel dos fitoesteróis na protecção contra o cancro da mama, não existe informação suficiente que descreva a influência da dieta nos níveis séricos de fitoesterol e como, por sua vez, os fitoesteróis podem influenciar o risco de cancro da mama. Existem dois estudos publicados de fitoesteróis séricos relacionados com o cancro da mama em seres humanos., Na primeira, realizada em 10 de mulheres com doença benigna da mama e 11 pacientes com câncer de mama, fitoesterol concentrações no tecido adiposo (campesterol, estigmasterol e β-sitosterol) foram inferiores, em casos de câncer de mama do que nos controles, embora as diferenças não foram significativas (28). No segundo estudo em 11 mulheres saudáveis, 7 mulheres em lactação e 14 mulheres diagnosticadas com cancro da mama, os níveis séricos de fitoesterol não diferiram entre os grupos (29). No entanto, estes estudos tiveram grandes limitações devido à baixa validade interna (e.g.,, falta de informação sobre a comparabilidade dos casos e controlos, falta de controlo da variabilidade técnica e biológica dos fitoesteróis nos casos e controlos) e da pequena dimensão da amostra. Além disso, nenhum dos estudos incluiu informações dietéticas.

verificou-se que os níveis de soro de fitoesteróis em que os participantes neste estudo variou de 22 a 27 µmol/L (de 9,1 11,2 mg/L), que é semelhante ao 7-41 µmol/L gama (2.9–17.0 mg/L) encontrados em estudos anteriores realizados em indivíduos normais (3,31)., No grupo de intervenção, O β-sitosterol aumentou 20% devido à ingestão de frutos secos, sementes e soja na dieta (1,31). Neste estudo observou-se uma variabilidade mais elevada no campesterol sérico em comparação com o β-sitosterol., Isto pode refletir: 1) a variação nas concentrações desses fitoesteróis em diferentes vegetais e alimentos de origem vegetal consumidos (1,30); 2) as diferenças na absorção e eliminação de taxas do corpo (9,30); 3) um pouco maior técnico da variabilidade no nosso estudo para o campesterol, em comparação com β-sitosterol; e 4) a maior variabilidade intra-individual para campesterol anteriormente realizado estudo de confiabilidade (20).,

Em conclusão, o presente estudo apoia a hipótese de que uma dieta à base de plantas rica em fibras de cereais, soja e linhaça pode aumentar os níveis circulantes de β-sitosterol. Estes resultados indicam que os fitoesteróis podem ser utilizados como biomarcadores da exposição em estudos observacionais ou como indicadores de conformidade em estudos de intervenção alimentar de prevenção do cancro.

os autores agradecem ao pessoal da Associação “Attive come prima”, onde o trabalho de campo foi realizado. Também agradecemos a A. Burrone, S. Gastaldi, C. Gazzola e A., Ricciuti para a ajuda com a organização logística do projeto DIANA, e todas as mulheres participantes.

LITERATURA CITADA

Abreviaturas

• DIANA

  a dieta e andrógenos estudo

• ÉPICO

  Investigação Prospectiva Europeia sobre Câncer e Nutrição de Estudo

• ICC

  coeficiente de correlação intraclasse

• SM

  sphingomyelin.,

notas